[发明专利]一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法

说明书

技术领域

本发明属于荧光探针材料检测方法领域，特别涉及一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法。

背景技术

亚锡离子应用于预防龋齿的历史由来已久，作为人体生理活动所必需的微量元素，大量证据表明Sn²⁺除了能有效抑制癌细胞的生成，还可促进蛋白质和核酸的合成，促进身体的生长发育，还参与组成多种酶以及黄素酶的生物反应，从而增强体内环境的稳定性。亚锡的缺乏可能会导致生长不良和听力丧失，但亚锡过多积累造成对锌离子代谢干扰，会影响呼吸道和消化系统。

亚锡离子具有很强的还原性，SnCl₂是人们熟悉的还原剂。它能把许多金属离子还原成低氧化态，甚至还原到金属。亚锡离子还有很强的配位性，在(合成化学，2006)报道了1-(2-吡啶偶氮)-2-萘(PAN)与亚锡离子能很好的络合形成新的混合胶束具有很好的荧光性能，从而达到检测亚锡的目的，利用荧光光谱法检测线能达到2ng·mg^-1。

目前，人们用来检测Sn²⁺的方法有火焰原子吸收光谱法、电位膜传感法及紫外/可见分光光度法，相比于这些方法，荧光分析法具有操作简单，灵敏度高，选择性好的优势。(Analyst,2014,139,5223)报道了设计合成了两种用于真核和原核细胞的Sn²⁺荧光探针，其检测线分别达到5.7×10^-7和4.6×10^-7。申请人申请的中国专利201510869087.0“检测汞离子的反应型罗丹明类荧光探针及其制备与应用”，在乙腈溶液中，使用荧光光谱法，在激发波长为560nm，检测发射波长为580nm，检测汞离子的浓度在0.89-60μM的范围达到一个很好地线性，采用荧光探针法检测汞离子溶液，可实现对汞离子的实时和快速的检测，在环境检测方面有较好的应用前景。

罗丹明及其衍生物作为开/关形式的荧光探针，具有较高的荧光量子产率，较大的摩尔消光系数，在可见光区具有较长的发射和吸收波长。螺旋状罗丹明内酰胺化合物本身具有一定的结构张力，在与重金属粒子结合后，内酰胺氮原子的质子化将导致氮原子电荷密度减少，从而引发螺旋中心C-N键的开裂，同时，断键后原本富电子的螺旋环将进行电荷重排，形成更稳定的刚性平面大π键结构，从而产生荧光变化和颜色变化。和不同金属离子作用后，所形成的作用不同，罗丹明衍生物会发生荧光和颜色的变化也各不相同。因而罗丹明及其衍生物在作为探针检测重金属离子方面具有很大的发展前景。荧光分子探针具有灵敏度高，专一性强，无损伤快速准确等特点在检测生物体内金属方面显示出了独特的优势，并广泛应用于金属离子参与的生物学研究(Inorg.Chim.Acta,2012,381,2-14)。罗丹明B又称玫瑰红B，罗丹明基荧光探针具有良好的荧光性能和较小的细胞毒性，广泛应用于生物体内离子及小分子的检测，生物大分子的分析和检测以及复杂生物体系的研究。该类荧光探针在识别前后荧光呈现从无到有的增强型响应，具有很高的灵敏度，通过对识别基团的精心选择和设计该类探针表现出良好的选择性和抗干扰性(Chem.Rev.2012.112.1910-1956)。令人遗憾是目前很少见到是识别亚锡离子的罗丹明基荧光探针的报道。综上所述，开发出了一种可检测亚锡离子的罗丹明基荧光探针对于研究亚锡离子的生物活性和药理作用具有重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法。

为了达到上述目的，本发明提供了一种罗丹明类荧光探针在检测亚锡离子含量中的应用。

优选地，所述的罗丹明类荧光探针的结构式为：

本发明还提供了一种利用罗丹明类荧光探针检测亚锡离子的方法，其特征在于，包括：

步骤1：配制罗丹明类荧光探针溶液；

步骤2：配制亚锡离子溶液；

步骤3：配制pH＝6.0～7.0的NaOH/NaH₂PO₄缓冲溶液；

步骤4：分别将步骤1得到的罗丹明类荧光探针溶液加入到步骤3得到的NaOH/NaH₂PO₄缓冲溶液中得到多个含有荧光探针的缓冲体系，分别加入不同体积的步骤2所得的亚锡离子溶液，得到不同浓度的亚锡离子溶液，静置，在激发波长为560nm的条件下，检测发射波长为587nm的荧光强度，以亚锡离子的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到线性关系曲线；