[发明专利]一种用于叉头转录因子O1基因突变检测的试剂及应用

权利要求书

1.一种用于人FOXO1基因突变检测的试剂在制备检测子宫内膜癌的检测试剂中的应用，其特征在于，所述用于人FOXO1基因突变检测的试剂包括：

如SEQ ID NO.1所示的检测R609C突变型FOXO1基因序列的正向引物；

如SEQ ID NO.2所示的检测R609C突变型FOXO1基因序列的反向引物；

如SEQ ID NO.3所示的检测D624N突变型FOXO1基因序列的正向引物；

如SEQ ID NO.4所示的检测D624N突变型FOXO1基因序列的反向引物；

如SEQ ID NO.5所示的检测R609C突变型FOXO1基因序列的突变型PNA荧光探针；

如SEQ ID NO.6所示的检测D624N突变型FOXO1基因序列的突变型PNA荧光探针；

如SEQ ID NO.7所示的用于阻断FOXO1基因609密码子野生型序列扩增的PNA序列；和

如SEQ ID NO.8所示的用于阻断FOXO1基因624密码子野生型序列扩增的PNA序列；

所述PNA荧光探针的5'端的荧光报告基团为：FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5，3'端的淬灭基团为：TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL；

所述用于人FOXO1基因突变检测的试剂还包括PCR反应液、609密码子和624密码子突变型参考品、609密码子和624密码子野生型参考品；其中PCR反应液包括：DEPC水、具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCR Buffer、RNASIN、M-MLV逆转录酶、oligo dT和含Mg离子的溶液；所述609密码子突变型参考品为含SEQ ID NO.9所示的序列的重组质粒DNA；所述609密码子野生型参考品为含SEQ ID NO.10所示的序列的重组质粒DNA；所述624密码子突变型参考品为含SEQ ID NO.11所示的序列的重组质粒DNA；所述624密码子野生型参考品为含SEQ ID NO.12所示的序列的重组质粒DNA。

2.根据权利要求1所述的用于人FOXO1基因突变检测的试剂在制备检测子宫内膜癌的检测试剂中的应用，其特征在于，所述PCR反应液中具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶为Taq酶。

3.根据权利要求2所述的用于人FOXO1基因突变检测的试剂在制备检测子宫内膜癌的检测试剂中的应用，其特征在于，所述含Mg离子的溶液为MgCl₂溶液，所述PCR反应液各组分在PCR扩增反应体系中的终浓度为：Taq酶0.01U/µL～0.05U/µL，dNTPs 0.2～0.6 mM，10×PCR Buffer 1×，RNASIN 40U/µL～60U/µL，M-MLV逆转录酶200U/µL～320U/µL，MgCl₂ 1.5～5.0mM，溶剂为DEPC水；所述检测R609C或D624N突变型FOXO1基因序列的正向引物的终浓度均为0.05～0.9μM，所述检测R609C或D624N突变型FOXO1基因序列的反向引物的终浓度均为0.05～0.9μM，所述oligo dT终浓度为0.05～0.9µM，所述用于阻断包含FOXO1基因609或624密码子野生型序列扩增的PNA序列终浓度均为0.05～0.9μM，所述检测R609C突变型或D624N突变型FOXO1基因序列的突变型PNA荧光探针的终浓度均为0.05～0.9μM。