[发明专利]一类抗CD20靶向抗体及用途

说明书

本发明公开了一类新型CD20抗体及其在制备抗体肿瘤药物中的应用。更具体地，本发明公开了兼具I型和II型CD20抗体优势的新型CD20抗体,其核酸序列、氨基酸序列及其在制备抗肿瘤药物中的应用，既保留了I型CD20抗体诱导强烈CDC杀伤的功能，又兼具II型CD20抗体的优势，能够诱导强烈的细胞死亡，具有比亲本I型CD20抗体Rituximab和II型CD20抗体更好的抗肿瘤活性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一类抗CD20靶向抗体、其制备方法及其在制备抗体肿瘤药物中的应用。本发明公开的抗CD20靶向抗体，既具有I型CD20抗体抗肿瘤杀伤的优势，诱导CDC杀伤肿瘤细胞，又具有II型CD20抗体抗肿瘤的优势，能够诱导强烈的细胞死亡杀伤肿瘤细胞。表现出比I型CD20抗体Rituximab更好的抗肿瘤活性。

背景技术

白血病非霍奇金氏淋巴瘤（Non Hodgkin’s lymphoma , NHL）是临床最常见的血液系统和淋巴系统恶性肿瘤，好发于青壮年，发病率和死亡率呈逐年上升趋势，其中85%为B细胞来源。CD20 抗原是一种B 细胞分化抗原，仅位于前B 细胞、不成熟B 细胞和成熟B细胞，它在95 %以上的B 细胞性淋巴瘤中表达，而在造血干细胞、浆细胞和其他正常组织细胞中不表达。更为重要的是，CD20 分子在膜上为四次跨膜蛋白，与靶向抗体结合后无显著内吞及脱落，也不会因为与抗体的结合而发生抗原调变，故成为治疗B 细胞淋巴瘤的理想靶点。

CD20单抗疗法在B细胞淋巴瘤治疗中已取得了令人满意的成果。 CD20抗体Rituximab已经作为一线用药，广泛应用于B淋巴瘤的临床治疗。虽然Rituximab在B淋巴瘤的临床治疗取得突破性的进展，其具有近50%的治疗反应率和大约10%的完全反应率，被认为是最有效的肿瘤靶向抗体药物之一。但是大部分患者在治疗过程中会逐渐产生复发和抵制。因此，迫切需要设计更为有效的CD20抗体用于B淋巴瘤的治疗。

目前认为，CD20靶向抗体的抗肿瘤作用机制主要包括：补体介导的细胞溶解作用（CDC作用）、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）和对肿瘤细胞的诱导死亡作用（CellDeath）。根据CD20靶向抗体作用机制的不同可以将其分为两种类型：I 型CD20抗体，包括Rituximab和大部分CD20抗体（1F5、2H7、2F2等），能够诱导强烈的CDC杀伤而诱导细胞死亡作用较弱；II型CD20抗体包括B1、11B8和Obinutuzumab，能够诱导强烈的细胞死亡而CDC杀伤较弱。目前已经批准用于临床治疗的CD20抗体，除了II型抗体B1与131I偶联药物Tositumomab和近期刚获批的Obinutuzumab外，主要为I 型CD20抗体（Rituximab和2F2）。I型CD20抗体在B淋巴瘤的临床治疗中取得良好的治疗效果，表明I型CD20抗体诱导的强烈的CDC杀伤在B淋巴瘤的临床治疗中具有非常重要的作用。然而随着研究的深入，II型CD20抗体诱导的强烈的非caspase依赖细胞死亡在淋巴瘤治疗中的重要作用逐渐显现。II型CD20抗体Obinutuzumab在临床前和临床试验中都表现出较好的肿瘤杀伤效果。虽然Obinutuzumab是经过糖基化修饰的II型CD20抗体，但是进一步的研究表明，糖基化修饰增强其ADCC和抗体依赖细胞吞噬作用（ADCP）的Obinutuzumab与未经过糖基化修饰的Obinutuzumab在小鼠体内清除B细胞中并未有显著差异。更重要的是，II型CD20抗体Obinutuzumab在淋巴瘤的临床试验中表现出比I型CD20抗体Rituximab更好的治疗效果，表明II型CD20抗体诱导的强烈的细胞死亡在B淋巴瘤治疗中发挥更加重要的作用。目前，美国FDA已经批准Obinutuzumab用于慢性淋巴细胞白血病的临床治疗。这些研究结果不仅表明，CD20靶向抗体诱导的CDC杀伤和细胞死亡在靶向抗体有效杀伤淋巴瘤细胞中都具有非常重要的作用，而且CD20靶向抗体诱导的非caspase依赖细胞死亡对杀伤淋巴瘤更加重要。然而目前，尚未有兼具I型和II型CD20抗体优势的新型CD20抗体被报道。因此，如何设计出兼具I型和II型CD20抗体抗肿瘤优势，能够同时诱导强烈CDC杀伤和细胞死亡的新型CD20抗体是目前靶向抗体研究领域的热点和难点。