[发明专利]一种基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感染的方法

权利要求书

1.一种基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感染的方法，其特征 在于，包括以下步骤：

(1)、将SEQIDNO.1～3所示的任意一条生物素标记的石斑鱼虹彩病毒核酸适配体与 待测样品进行结合，然后清洗；

(2)、将步骤(1)中结合了核酸适配体的样品进行离心，移除上清，将富集到的样品与辣 根过氧化物酶-链霉亲和素混匀进行结合；

(3)、步骤(2)得到的结合了辣根过氧化物酶-链霉亲和素的样品进行清洗，然后移入酶 标板中，每孔加入TMB显色液避光反应，最后加入终止液终止反应；

(4)、检测待测样品在450nm处的吸光值，根据吸光值的变化来判断样品室是否被石斑 鱼虹彩病毒感染。

2.根据权利要求1所述的基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步骤(1)的生物素标记的石斑鱼虹彩病毒核酸适配体与待测样品结 合前先进行复性，具体为：将生物素标记的核酸适配体在94℃高温变性10min，然后迅速插 入到冰中复性10min。

3.根据权利要求1所述的基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步骤(1)所述的核酸适配体与待测样品结合，为200nM的核酸适配体 与200μl的待测样品结合。

4.根据权利要求1所述的基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步骤(1)所述的结合，结合时间为1～30min，结合温度为4～37℃。

5.根据权利要求1所述的基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步骤(1)所述的清洗，是用PBS清洗3次。

6.根据权利要求1所述的基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步骤(2)所述的辣根过氧化物酶-链霉亲和素混匀结合，辣根过氧化 物酶：链霉亲和素的体积比为1:10000，添加量为200μl，结合时间为15min。

7.根据权利要求1所述的基于核酸适配体的酶联免疫吸附技术检测石斑鱼虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步骤(3)所述的清洗，是用PBS清洗5次；所述的酶标板为96孔酶标 板；所述的TMB显色液避光反应，为加入100μl避光反应10min；所述的加入终止液，为加入50 μl2M的H₂SO₄。