[发明专利]一种猪圆环病毒2型的LAMP可视化快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测猪圆环病毒2型的LAMP引物，其特征在于，所述LAMP引物包括上游内部引物FIP、上游外部引物F3、下游内部引物BIP、下游外部引物B3，以及一对环引物：LF和LB，具体序列如下：

FIP：5’-CAGGAATACAATATCCGTGTAACCATTTTGGTTAAGTGGGGGGTCTT-3’；

F3：5’-CACTTCGTAATGGTTTTTATTATTTA-3’；

BIP：5’-GAGGCCTACGTGGTCTACATTTTTCAAACAACAAAAGAAATCAGCTATG-3’；

B3：5’-TCCACTATTGATTACTTCCAAC-3’；

LF：5’-AACCATGTATGTACAATTCAGAGAATTTAATC-3’；

LB：5’-TTCCAGCAGTTTGTAGTCTCAGC-3’。

2.一种含有权利要求1所述的6条引物的猪圆环病毒2型的LAMP可视化快速检测试剂盒。

3.根据权利要求2所述的LAMP可视化快速检测试剂盒，其特征在于，还包含LAMP反应体系，按反应总体积为25μL为例，包含：ddH₂O4.5μL，1×dNTP 3.0μL，10×buffer 2.5μL，引物FIP 2μL，引物BIP 2μL，引物F3 0.5μL，引物B3 0.5μL，引物LF 2μL，引物LB 2μL，甜菜碱4μL，模板1μL，Bst酶1μL。

4.一种检测猪圆环病毒2型的LAMP方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待测样品总DNA作为反应模板；

2)配制LAMP检测体系：按反应总体积为25μL为例，包含：ddH₂O4.5μL，1×dNTP 3.0μL，10×buffer 2.5μL，引物FIP 2μL，引物BIP 2μL，引物F3 0.5μL，引物B3 0.5μL，引物LF 2μL，引物LB 2μL，甜菜碱4μL，Bst酶1μL；其中，引物FIP、引物BIP、引物F3、引物B3、引物LF、引物LB的序列如权利要求1所述；

3)取1μL步骤1)提取的样品总DNA加入到步骤2)配制的LAMP检测体系中，混匀，放入PCR仪进行PCR反应，PCR反应程序为：59℃45min，80℃3min；

4)步骤3)PCR反应结束后，向反应物中加入SYGree1染料，观察颜 色变化：显色为绿色的样品为阳性，含有猪圆环病毒2型；不发生颜色变化的样品为阴性，不含猪圆环病毒2型。

5.根据权利要求4所述的检测猪圆环病毒2型的LAMP方法，其特征在于，所述LAMP检测体系的配制过程为：

1)将ddH₂O 4.5μL，1×dNTP 3.0μL，10×buffer 2.5μL，引物FIP 2μL，引物BIP 2μL，引物F3 0.5μL，引物B3 0.5μL，引物LF 2μL，引物LB 2μL，甜菜碱4μL加入离心管中，涡旋混匀，瞬离；

2)将步骤1)离心后得到的混合物在95℃水浴锅中加热5min；再放置冰上冰浴5min；

3)将1μL Bst酶添加到离心管中，搅拌均匀即得到LAMP检测体系。