[发明专利]一种霉菌毒素类胶体金定量检测装置及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，尤其涉及一种霉菌毒素类定量检测装置及制备方法。

背景技术

霉菌是一种多细胞微生物，广泛存在于自然界中，在微生物学上属于真菌。其通过 孢子的形式繁衍。霉菌毒素是由霉菌或真菌产生的有毒有害物质。在土壤中，在植物上，包 括谷物、饲草和青贮饲料均可发现霉菌毒素。高温高湿的环境条件通常有利于饲料中霉菌 的生长和霉菌毒素的产生。

迄今为止已经分离和鉴定出来的霉菌毒素有300多种。一般而言，霉菌毒素主要是 由4种霉菌属所产生：曲霉菌属(主要分泌黄曲霉毒素、赭曲霉毒素等)、青霉菌属(主要分泌 橘霉素等)、麦角菌属(主要分泌麦角毒素)、镰孢菌属(主要分泌玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、 T－2毒素、串珠镰孢菌毒素)，也是最见的几种霉菌毒素。

霉菌毒素对动物的危害是世界性的问题，霉菌大多属于中温型微生物，最适宜生 长温度一般为20～30℃，霉菌繁殖产毒的最适温度为25～30℃，其中曲霉菌属最适宜生长 温度为30℃，青霉属为28℃左右，镰刀菌一般为20℃左右，一般危害饲料的霉菌孢子在7℃ 时即可发芽，温度高于49℃时霉菌会被杀死或进入孢子阶段。霉菌毒素的危害主要体现在 两方面，第一养禽业：种禽摄入霉变饲料容易出现产蛋下降、受精率下降、孵化率下降；子代 生长不良，发生肠道综合症且难以控制。肉鸡摄入霉变饲料后，机体容易出现腹水、肾肿、生 长不良等症状，还会导致疫苗免疫失败，容易诱发新城疫、传支、流感等病毒性传染病，临床 难以控制。第二方面人类健康：霉菌毒素在畜产品中的残留会对人体健康产生影响。目前霉 菌毒素已成为食品安全的最大隐患，影响到人类健康。畜禽食品被污染后，人食用会发生 急、慢性中毒，或出现致畸、致癌、致突变。

中国是农业大国，但中国种殖业比重较大的是农户散养或者小型养殖场养殖，规 模分散，植物霉菌毒素类疫病防治水平和生产管理能力落后，在发生疫病流行时，难以有效 控制。存在着作物领域监管对像种类多、数量大、分布广、规模不一等问题，尤其作物环节中 具有极强的隐蔽性和时间性的特点，现场执法检查如果靠眼面检查从根本上不能积习难改 现其问题和隐患。传统实验检测也存在程序复杂、检测时间长的技术问题，检测结果出来后 产品已经销售或转移，无法及时处理，无法满足现场检测需要及时、高效、快速的需要。而 且，目前成熟的快速检测技术大多是针对单一疫病或者药物残留进行，也难以达到对检测 样品种类多样、检测项目繁多的检测的目的。

随着生物技术的发展，开始用生物技术来对植物疫病、植物产品质量进行安全检 测。比如PCR检测法、酶联免疫法(ELISA)和操作比较简单的动物疫病免疫层析检测方法， PCR检测法常用于核酸方面的检测，敏感度好且准确性相对较高，酶联免疫法常用于检测兽 药残留及动物疫病，具有特异性和灵敏度比较高的优点，对于现场初筛有较好的应用前景， 但这两者都需要专业的仪器设备和操作人员进行检验操作，对试验条件要求较高，施行不 方便，成本高。

目前霉菌毒素检测常用的方法具体如下几种：

薄层层析法：

TLC法是针对不同的样品，用适宜的提取溶剂将霉菌毒素从样品中提取出来，经柱 层析净化，再在薄层板上层析展开、分离，利用霉菌毒素的荧光性，根据荧光斑点的强弱与 标准比较测定其最低含量。TLC法样品前处理繁琐，且提取和净化效果不够理想，提取液中 杂质较多，在展开时影响斑点的荧光强度。

色谱法：

色谱法，包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱等，一直是最重要的霉菌毒素的化学 分析方法。现在比较普遍的霉菌毒素的分析方法还是液相色谱法，包括液相色谱-质谱联用 技术。该法快速而准确，但需要昂贵的仪器设备，仅限于专业检测机构获得科研和调查分 析、监测使用，未能在企业及基层广泛推广使用，而且其结果的滞后效应大大降低了对生产 实际的指导效果。

免疫化学检测法：(胶体金免疫层析法，酶联免疫吸附法)

免疫学检测方法是基于抗体与抗原或半抗原之间的选择性反应而建立起来的一 种生物化学分析法。通常具有高的选择性和很低的检出限，广泛用于各种抗原、半抗或抗体 的测定，一般可分为荧光免疫法、发光免疫法、免疫法及电化学免疫法等非放射免疫法和放 射免疫法，其中在饲料霉菌毒素检测中应用较广的主要是酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体 金免疫层析法。