[发明专利]一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法有效
| 申请号： | 201610261953.2 | 申请日： | 2016-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN105695432B | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 王栋;徐岩;张璋 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/20 | 分类号： | C12N9/20 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 耿晓岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改变 脂肪酶 催化 活性 重塑 方法 | ||
1.一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法，其特征在于，所述方法是对脂肪酶进行变性和复性处理，在变性或者复性的过程中添加膜环境复合物，所述膜环境复合物是来自华根霉菌体细胞的膜环境复合物；
所述膜环境复合物的提取方法是：(1)利用华根霉菌体经丙酮洗涤制备丙酮粉；(2)将丙酮粉悬浮于磷酸缓冲液中，搅拌、离心、取沉淀、洗涤两次以上，然后将洗涤后的沉淀重新悬浮于含有0.05-0.15％Triton X-100的磷酸缓冲液中，搅拌、离心，将得到的沉淀悬浮于1-2％Triton X-100磷酸缓冲液中，振荡4-12小时、离心，得到的上清液为膜环境复合物及膜结合蛋白；(3)在提取液中加入吸附剂Bio-beads，振荡、离心，所得上清液即为膜环境复合物WTS；
所述活性重塑是指脂肪酶催化酯化反应的活性重塑。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性重塑方法，在变性时 单独添加膜环境复合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性重塑方法，在变性时同时添加膜环境复合物和表面活性剂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性重塑方法，在复性时单独添加膜环境复合物。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性重塑方法，在复性时同时添加膜环境复合物和表面活性剂。
6.根据权利要求3或5所述的方法，其特征在于，所述同时添加膜环境复合物和表面活性剂中的表面活性剂为以下任意一种：两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂、CTAB阳离子表面活性剂。
7.根据权利要求3或5所述的方法，其特征在于，所述同时添加膜环境复合物和表面活性剂中的表面活性剂为以下两种以上：两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂、CTAB阳离子表面活性剂。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶为外源表达的华根霉成熟肽脂肪酶。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶为外源表达的华根霉脂肪酶r27RCL。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶为外源表达的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶Lipozyme TL 1M。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶为外源表达的洋葱假单胞菌脂肪酶62309。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶为外源表达的南极假丝酵母脂肪酶CALB。
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