[发明专利]一种大螟对氯虫苯甲酰胺抗性的分子检测方法及其专用引物

权利要求书

1.特异性引物组合物在制备检测大螟对氯虫苯甲酰胺抗性试剂上的用途，其中所述的引物组合物由下列序列组成：

引物1：5’-TGTTGGATGTCGCTGAGGG-3’；

引物2：5’-TGTTGGATGTCGCTGAGGA-3’；

引物3：5’-GAAGAAGTTGAACGCGATCA-3’；

其中，引物1为敏感型专用上游引物，引物2为抗性专用上游引物，引物3为敏感型/抗性专用下游引物；引物1的3’末端第1位核苷酸与突变前的核苷酸一致，引物2的3’末端第1位核苷酸与突变后的核苷酸一致；此外，为了增加等位基因特异性PCR方法的特异性，引物1和引物2的3’末端第3位和第4位核苷酸引入了错配碱基G和A；其中，引物1和引物3为敏感引物对，引物2和引物3为抗性引物对。

2.根据权利要求1所述的用途，检测大螟鱼尼丁受体基因是否发生了G4924E突变，所述鱼尼丁受体基因的G4924E突变指的是鱼尼丁受体基因的开放阅读框从5’末端第14771位核苷酸由G突变为A，从而检测大螟对氯虫苯甲酰胺的抗性。

3.一种检测大螟鱼尼丁受体G4924E突变的基因型的方法，包括以下步骤：

以待检测大螟基因组DNA为模板，分别采用在权利要求1中所述的敏感引物对和抗性引物对进行PCR扩增，获得以下结果：如果采用敏感引物对时扩增得到了140bp的扩增产物而同时采用抗性引物对没有扩增到140bp的扩增产物，则待检测大螟为GG基因型，即敏感基因型；如果采用敏感引物对时没有扩增得到140bp的扩增产物而同时采用抗性引物对扩增得到了140bp的扩增产物，则待检测大螟为AA基因型，即抗性基因型；如果采用敏感引物对时扩增得到了140bp的扩增产物而同时采用抗性引物对也扩增得到了140bp的扩增产物，则待检测大螟为GA基因型，即敏感和抗性杂合基因型。