[发明专利]一种快速高灵敏检测大田软海绵酸毒素的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种快速高灵敏检测大田软海绵酸毒素的试剂盒，其特征在于， 包括OA-BSA标记的可拆卸8*12的酶标板、OA系列浓度的标准品、 HRP标记试剂盒标记的OA单克隆抗体HRP-MAb、10×浓缩洗涤液、 显色底物TMB、终止液HCl。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，OA-BSA的制备过 程为：

(1)50μg的OA粉剂溶解在50μl甲醇溶液中，得到OA溶液。

(2)将10ul20mg/ml的EDC和10ul10mg/ml的NHS加到OA溶液 中，缓慢震荡2小时，得到活化的OA溶液，其中，EDC和NHS的 溶剂是0.1MMES，pH＝5.5。

(3)将400μl1mg/ml的BSA溶解在0.01MpH＝7.2的PBS缓冲液 中，逐滴加入活化的OA溶液中。

(4)以上混合液在震荡条件下持续反应4小时，得到OA-BSA溶液， 同时将透析袋MW＝10000放在体积分数20％乙醇中煮沸后冷却。

(5)将上述OA-BSA溶液用透析袋透析，透析液为0.01MpH＝7.2的 PBS缓冲液，透析液每8小时更换一次，共更换四次，得到OA-BSA 原液。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，OA-BSA标记的可 拆卸8*12的酶标板的制备过程为：

(1)包被酶标板，孵育，洗板；包被缓冲液为0.05MpH9.6的碳酸 盐缓冲液，1L碳酸盐缓冲液中含有1.59gNaCO₃、2.93gNaHCO₃和 0.1MNaCl；

(2)封闭酶标板，孵育，洗板；封闭液为质量分数1％的BSA溶液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，酶标板的孵育温度 为35℃，孵育时间为1h。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，10×浓缩洗涤液为 0.1M的PBS+1％Tween20，使用时稀释10倍。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，标准品浓度为0、 0.2、0.5、1、2、5ng/ml。

7.一种利用权利要求1所述试剂盒检测大田软海绵酸毒素的方法， 其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别将标准品和样品加入OA-BSA标记的可拆卸8*12的酶标 板孔中，向每个孔中加入HRP-MAb，孵育，洗板；

(2)加显色底物TMB，孵育；

(3)加终止液HCl，在450nm处测定吸光度；

(4)根据标准品的吸光度绘制检测OA毒素的标准曲线，根据标准 曲线计算样品中毒素的浓度。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，加入酶标板孔的样品 的前处理过程为：取0.2g搅碎贝肉加1ml体积分数90％甲醇，涡旋 震荡5min，7000rpm离心3min，取上清液过滤，过滤器为0.25um有 机系，稀释10倍待检测。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，OA-BSA100ul，封闭 液200ul，标准品和样品分别100ul，HRP-MAb50ul，TMB100ul， HCl100ul。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的孵育 时间30min，步骤(2)中的孵育时间15min。