[发明专利]一种用于检测菌的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测猪丹毒杆菌的LAMP试剂盒，其特征在于，包括特异性引物组、反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和核酸染料，其中所述引物如下所示:

外引物F3：ATGATGGAAAAAGAAATTCATCC(SEQ ID NO:1)外引物B3：GAACATCTCCACTTCTTTGG(SEQ ID NO:2)

内引物FIP：ACGTTCCAAGTTTGGATATACATCT-TTGTATCT TGAACTTTATGCTATGC(SEQ ID NO:3)

内引物BIP：GCGAACGCGGTTGTTGAATC-AGTTCCTGTAGT TTCTTCTCTC(SEQ ID NO:4)；

所述反应缓冲液由2mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液和6mM Mg²⁺组成；

进一步包括DNA提取试剂以及阳性对照和阴性对照；

所述DNA提取试剂是CTAB抽提缓冲液。

2.一种检测猪丹毒杆菌的LAMP方法，所述方法用于对食品中的猪丹毒杆菌进行鉴定，包括以下步骤：

(1)向待测样品中加入CTAB抽提缓冲液，按照常规CTAB法提取DNA；

(2)在PCR管中制备LAMP反应体系，其包括0.2μmol/μl的外引物F3 1μl、0.2μmol/μl的外引物B3 1μl、1.2μmol/μl的内引物FIP 1μl、1.2μmol/μl的内引物BIP 1μl、反应缓冲液2.5μl、8U/μl的Bst DNA聚合酶1μl、模板DNA 2μl，加水补充至25μl，并以猪丹毒杆菌基因组DNA作为阳性对照，以100mM Tris-HCl pH 8.0和50mM EDTA作为阴性对照，

其中所述引物如下所示：

外引物F3：ATGATGGAAAAAGAAATTCATCC(SEQ ID NO:1)

外引物B3：GAACATCTCCACTTCTTTGG(SEQ ID NO:2)

内引物FIP：ACGTTCCAAGTTTGGATATACATCT-TTGTATCT TGAACTTTATGCTATGC(SEQ ID NO:3)

内引物BIP：GCGAACGCGGTTGTTGAATC-AGTTCCTGTAGT TTCTTCTCTC(SEQ ID NO:4)；

(3)将步骤(2)中的PCR管于63℃恒温反应60min；

(4)分析判断反应产物结果：在(3)中所得反应产物中加入核酸染料SYBR Green I，反应液为橙色表示结果为阴性，待测样品中不含猪丹毒杆菌，反应液为绿色表示结果为阳性，待测样品中含有猪丹毒杆菌。