[发明专利]大环内酯类新化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种大环内酯类化合物的制备方法，其特征是：所述大环内酯类化合物结构式为：

所述制备方法为：将冰城链霉菌突变菌株经发酵及分离纯化而得；所述的冰城链霉菌突变菌株为Streptomyces bingchenggensis BC-120-4；发酵前需对菌株进行斜面培养、种子培养。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的斜面培养为：斜面培养基组成：葡萄糖10-12g/L，麦芽糖3-4g/L，酵母抽提粉3-4g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.5-0.6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5-0.6g/L，NaCl 0.5-0.6g/L，KNO₃ 1.0-1.2g/L，琼脂粉20-25g/L，pH 7.0-7.2，用去离子水配制，灭菌，接菌后置于28℃培养箱中，培养8-9天，将培养得到的孢子用无菌水配置成10⁷-10⁸c.f.u.ml^-1的孢子悬液备用。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的种子培养为：种子培养基组成：葡萄糖5-6g/L，麦芽糊精5-6g/L，可溶性淀粉1.0-1.2g/L，酵母粉5-6g/L，牛肉膏1.0-1.2g/L，酪蛋白胨1.0-1.2g/L，pH 7.0-7.2，用蒸馏水配制，灭菌，取斜面培养所得10⁷-10⁸c.f.u.ml^-1孢子悬液接种于种子培养基中，置于旋转式摇床，28℃培养46-52h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的发酵：发酵培养基组成：葡萄糖10-12g/L，乳糖25-30g/L，棉籽饼粉25-30g/L，CaCO₃ 0.3-0.4g/L，pH 7.0-7.2，用蒸馏水配制，灭菌，将种子培养所得种子液接入到发酵培养基中，置旋转式摇床，28℃发酵培养7-8天。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述的分离纯化的方法为：发酵液经100～200目筛网过滤后，滤渣用3-4倍体积甲醇提取，提取液浓缩后用等体积乙酸乙酯萃取3-4次，将萃取液浓缩后依次进行硅胶柱层析和RP-18柱层析后，得到两种化合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征是：所述的硅胶柱层析用到的填料是100～200目的硅胶，流动相为石油醚:乙酸乙酯＝100:0-50:50(V/V)进行梯度洗脱，流速10-20ml/min，依次收集洗脱液，薄层层析(TLC)检测合并相同组分；所述的RP-18柱层析使用混合溶剂，即甲醇:水＝80:20-95:5(V/V)进行梯度洗脱，流速3-5ml/min，薄层层析(TLC)检测合并相同组分。