[发明专利]毛序准噶尔乌头中二萜类生物碱的制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及植物化学领域，具体涉及从毛序准噶尔乌头药材中提取、分离具有药理活性的3个二萜类生物碱化合物。

背景技术

毛序准噶尔乌头(Aconitum soongaricum var.pubescens)是毛茛科乌头属植物的一种，主要分布于我国新疆(巴里坤)、中亚等地区。生海拔2200米一带山地林。该药材是准噶尔乌头的变种，与准噶尔乌头的区别是花序轴和花梗均有开展的短柔毛。研究显示，毛序准噶尔乌头具有重要的药用价值，作为一种具有悠久用药历史的传统民间药用植物，具有镇痛、镇静、祛风湿、治疗跌打损伤、止咳平喘、解热等功效。

目前国内外有关毛序准噶尔乌头二萜类生物碱的提取分离和结构鉴定及其相关的药理学研究尚处于初始阶段。因此对毛序准噶尔乌头中具有生物活性的二萜类生物碱成分进行提取分离研究很有必要，对毛序准噶尔乌头抗肿瘤活性的探究具有很大的学术价值。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种毛序准噶尔乌头中二萜类生物碱化合物的制备方法及用途。该方法以毛序准噶尔乌头药材为原料，用溶剂提取，酸溶碱沉后，溶剂萃取，通过硅胶柱层析法、硅胶制备薄层层析或葡聚糖凝胶LH-20柱层析法的两种或三种方式进行分离，得到3个二萜类生物碱化合物。本发明对所得到的化合物进行了体外细胞毒活性测定，实验结果表明：从毛序准噶尔乌头中分离得到的二萜类生物碱化合物14-苯甲酰基-8-甲氧基乌头宁，新江油乌头碱，查斯曼宁对人乳腺癌细胞MCF-7、人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC-3有不同程度的细胞毒活性，可用于制备抗肿瘤药物。

本发明所述的一种毛序准噶尔乌头中二萜类生物碱化合物的制备方法，该化合物1为14-苯甲酰基-8-甲氧基乌头宁；化合物2为新江油乌头碱；化合物3为查斯曼宁；具体操作按下列步骤进行：

a、取毛序准噶尔乌头地上部分，粉碎后，用体积分数10-95％的乙醇水溶液，甲醇或氯仿，采用冷浸、加热回流或超声提取，减压浓缩回收溶剂得到浸膏；

b、将浸膏分散于质量分数为1-5％硫酸或盐酸水溶液中，过滤，得到的酸水溶液，再用无水碳酸钠或浓氨水进行处理，氯仿萃取，减压浓缩回收氯仿得到总生物碱；

c、将步骤b中的总生物碱经硅胶柱层析法、硅胶制备薄层层析法或葡聚糖凝胶LH-20柱层析法中的两种或三种方式进行分离，再采取薄层层析法检测分析，即得到二萜类生物碱化合物为14-苯甲酰基-8-甲氧基乌头宁；新江油乌头碱；查斯曼宁。

步骤c中所用硅胶柱层析法为常压或加压柱层析，所用填料为硅胶，用体积比40:1，30:1，20:1，10:1，5:1，1:1的氯仿:甲醇混合物，体积比10:1:0.1％的正己烷:丙酮:二乙胺混合物，体积比10:1，5:1，1:1的正己烷:乙酸乙酯混合物为洗脱剂，采用等度或梯度洗脱。

步骤c中所述硅胶制备薄层层析法为常压层析，展开系统为正己烷、乙酸乙酯和氨水的混合物。

步骤c中所述葡聚糖凝胶LH-20柱层析法的洗脱剂为体积比1:1的氯仿:甲醇，采用等度洗脱。

所述的方法获得的二萜类生物碱化合物为14-苯甲酰基-8-甲氧基乌头宁、新江油乌头碱和查斯曼宁在制备抗人乳腺癌、人肺腺癌和人前列腺癌药物中的用途。

本发明所述的毛序准噶尔乌头中的二萜类生物碱化合物的制备方法，该化合物的结构式为：

其中：化合物1的名称为14-苯甲酰基-8-甲氧基乌头宁；化合物2的名称为新江油乌头碱；化合物3的名称为查斯曼宁。

通过本发明所述方法获得的3个二萜类生物碱化合物为14-苯甲酰基-8-甲氧基乌头宁、新江油乌头碱和查斯曼宁进行了体外细胞毒活性测定，实验结果表明：对人乳腺癌细胞MCF-7、人肺腺癌细胞A549和人前列腺癌细胞PC-3有不同程度的细胞毒活性，可用于制备抗肿瘤药物。

本发明所述的毛序准噶尔乌头中二萜类生物碱化合物的制备方法，该方法获得的化合物：

化合物1，为白色无定型粉末，薄层板上喷以改良碘化铋钾显色剂溶液，显橘红色，HR-TOF-MS(m/z)给出的准分子离子峰[M+H]⁺618.3000，确定分子式为C₃₃H₄₇NO₁₀；

¹H NMR和¹³C NMR数据见表1和表2；