[发明专利]一种高活性松茸多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于大型真菌有效成分提取领域，具体涉及一种高活性松茸多糖的制备方法。

背景技术

松茸(TricholomamatsutakeSing)，分属于担子菌亚门、口蘑科、口蘑属，亦称松口蘑。松茸子实体香气宜人，肉质鲜美，含有多糖、蛋白质、氨基酸、多种维生素（维生素B1、B2、维生素C、维生素PP等）和微量元素等成分，具有很高的食用价值和药用价值，被誉为“食用菌之王”。

研究表明，松茸多糖是其重要的活性成分，具有明显的增强机体免疫能力、抑制癌细胞增殖和治疗糖尿病等特殊功能，其中，以抗肿瘤活性最为显著，远远高于灵芝。日本的千原吴郎等（1969）实验结果发现，松茸子实体多糖对小鼠肉癌S-180的抑制率高达91.8%，对艾氏腹水癌的抑制率为70%。

松茸主要生长于海拨1600-3200米的松林或栎树林中，是一种典型的外生菌根菌，属林下产品。目前，松茸的人工栽培仍未获得成功，子实体的产生纯粹依靠自然形成，因此产量很低，一年中仅夏季收获一次，是一种非常珍贵的稀有野生资源。目前，人们通常将松茸子实体烹饪后直接食用，虽然亦不失为一种美味佳肴，但并不能使其原有功效充分发挥出来。因此，合理开发松茸的野生资源，充分发挥其有效成分的功效，具有非常重要的意义。

松茸中多糖种类复杂，包含多种多糖组分，它们具有不同的分子结构和不同的分子量范围，试验表明，多糖的生物活性与分子量的大小和化学结构都有非常密切的关系。目前对于松茸多糖的提取方法大多采用热水浸提法，往往仅以提取得率作为优化提取工艺的指标，这样提取的多糖的生物活性未必最高；多糖的制备方法通常采用一步醇沉法，其缺点是把不同分子量与结构不同的多糖都混杂在一起，不能使其有效的活性部位得到富集，因此所表现出的生物活性往往不明显。

发明内容

本发明提供一种松茸多糖分离纯化的工艺，是一种新的提取分离方法，使多糖的活性部位得到有效富集，生物活性得到了很大提高，适用于规模化生产。

本发明的技术方案如下：A.原料的清洗：取1kg松茸子实体，洗净，60℃烘干至恒重；B.原料的粉碎：将松茸粉碎，80目过筛；C.原料的预处理；D.松茸多糖的溶出，制备松茸多糖TMP；E.松茸多糖的乙醇分级，富集活性部位，利用不同浓度的乙醇依次沉淀，得到系列精制多糖，从而获得高活性的松茸多糖组分。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤A．原料的清洗是指，去1kg松茸子实体，洗净，60℃烘干至恒重。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤B．原料的粉碎是指，将烘干了的松茸子实体粉碎，80目过筛。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤C．原料的预处理是指，取松茸粉末，置于8-16倍体积的60-95%乙醇溶液中浸泡18-30h（优选的，置于9-12倍体积的80-95%乙醇溶液中浸泡20-24h，更加优选的，置于10倍体积的95%乙醇溶液中浸泡24h），以除去脂肪、部分单（寡）糖及脂溶性色素，残渣于阴凉处风干。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤D．松茸多糖的溶出是指，预处理后的残渣风干后，选择浸提时间为1-3h，提取温度为70-100℃，水（蒸馏水）料比为10-25mL/g（v/w），80-120目纱布过滤（优选的，选择时间为1.5-2.5h，温度为80-95℃，水（蒸馏水）料比为15-18mL/g（v/w），90-110目纱布过滤；更加优选的，选择时间为2h，温度为90℃，水（蒸馏水）料比为15mL/g（v/w），100目纱布过滤），滤渣重复提取2次。合并两次提取液，旋转蒸发仪浓缩至提取总体积的1/15-1/5（优选的，浓缩至提取总体积的1/10-1/5）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤E.松茸多糖的酒精分级，富集活性部位是指，采用终浓度为15-35%的乙醇沉淀多糖（优选的，采用终浓度为25-30%的乙醇沉淀多糖），收集沉淀并干燥，得到松茸多糖组分1；对剩余上清继续采用终浓度为50%-70%的乙醇沉淀多糖（优选的，采用终浓度为55-65%的乙醇沉淀多糖），收集沉淀并干燥，得到松茸多糖组分2；对剩余上清继续采用终浓度为70-90%的乙醇沉淀多糖（优选的，采用终浓度为75-85%的乙醇沉淀多糖），收集沉淀并干燥，得到松茸多糖组分3。

本发明公开了一种高活性松茸多糖的制备方法，与现有技术相比，具有如下优点：本发明的创新性在于：