[发明专利]一种塞替派分子印迹电化学传感器的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种分子印迹传感器的制备方法及快速检测应用技术领域，特别涉及一种塞替派分子印迹电化学传感器的制备方法，具体是基于分子印迹特异性识别作用，用于检测药品、生物样品中的塞替派技术。

背景技术

塞替派（Thiotepa，TEPA）分子式为：C₆H₁₂N₃PS，也称为息安的宾、三胺硫磷、三乙烯硫代磷酰胺。本品为20世纪50年代初期合成的抗肿瘤药，是乙烯亚胺类烷化剂的代表。其作用原理类似氮芥，在体内产生活性烷化基团乙烯亚胺基具有较强的细胞毒作用。乙烯亚胺基能和参与细胞DNA组成的核碱基，如鸟嘌呤结合，改变DNA的功能，影响肿瘤细胞分裂。实验研究证明，本品对多种动物肿瘤均有明显的抑制作用，抑制核酸的合成；在组织培养中，可抑制动物胚胎细胞、人体细胞及肿瘤细胞的有丝分裂。近年来的表明，本品对垂体促滤泡激素含量有影响，腹腔注射可使卵巢滤泡萎缩，并可影响睾丸功能。属乙撑亚胺类烷化剂，因其有3个功能基团，可与DNA形成交叉联结，改变DNA的功能，影响癌细胞的分裂。临床用于乳腺癌、卵巢癌，也可用于肺癌、宫颈癌、黑色素瘤、食管癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、喉癌等。目前检测塞替派方法是酸碱滴定法，这种方法是经典的化学法，对常量测定准确度比较高，但选择性比较差，而且这种方法对微量的塞替派无法检测。因此，建立一种选择性好、灵敏度高、操作简便，用于检测塞替派的方法，对临床检测、药理研究、质量监控都具有十分重要的意义。

分子印迹技术是制备具有特定选择性和亲和能力的分子识别材料的新兴技术，并以其预定性、特异识别性和广泛实用性三大显著特点在色谱分离、固相萃取、仿生传感、膜分离等诸多领域显示出良好的发展与应用前景。当前开发具有分子识别功能的高选择性材料的主要方法之一，它是通过在模板分子周围形成一个高度交联的刚性高分子，除去模板分子后在分子印迹聚合物的网络结构中留下具有结合能力的识别位点，对模板分子表现出高选择识别性能的一种技术。这项技术以其构效预定性和特异识别性越来越受到人们的关注。

依据此技术制备的分子印迹电化学传感器，应用于药物分析、生命科学研究中起着十分重要的作用。将功能分子以适当方式修饰到电极上，制备选择性好、灵敏度高、有一定使用寿命可再生的电化学传感器成为分析科学工作者努力探索的课题。但是传统的印迹方法所制备的印迹膜厚度难以控制，高交联度使得电子传递速度和响应慢、检测下限高而且再生和可逆性差，影响分子印迹技术在电化学传感器中的应用。因此，建立一种灵敏、快速、简便、特异性高、重复性好经济使用的检测方法，对研究人员、生产企业、质控人员、政府管理部门等的迫切需要的，对药品、生物样品中的塞替派含量准确定量测定十分必要，对于塞替派生产和药理研究也具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是将分子印迹与电化学传感器相结合，提供了一种塞替派分子印迹电化学传感器的制备方法，主要是以塞替派为模板，在玻碳电极表面通过乙烯基三乙氧基硅烷、纳米金粒子的修饰，提高了传感器的灵敏度，采用滴涂法制备塞替派分子印迹电化学传感器。

仪器与试剂

CHI660B电化学工作站（上海辰华仪器公司），实验采用三电极体系：铂丝电极为辅助电极，Ag/AgCl为参比电极（SCE），玻碳电极（GCE）为工作电极；KQ-250E型超声波清洗器；

乙烯基三乙氧基硅烷，无水乙醇，硫酸，二亚乙基三胺，丙烯酸-1，2，3-三羧酸，马来酸酐，过流酸钾，塞替派；氯金酸，柠檬酸钠，磷酸缓冲溶液；所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

本发明的目的通过如下技术方案实现。

一种塞替派分子印迹电化学传感器制备方法，其特征在于,该方法具有以下工艺步骤：

（1）玻碳电极预处理：将玻碳电极0.01~0.05μm的Al₂O₃粉末进行表面抛光，然后用二次蒸馏水超声清洗，再用无水乙醇洗涤数次，用氮气吹干，将电极浸泡在含质量百分浓度为25~30%的乙烯基三乙氧基硅烷的无水乙醇溶液中，温度升至55±2℃浸泡150~180min，取出后，用无水乙醇洗涤数次，在放入9mol/L硫酸中浸泡20min，取出后，用水洗涤干燥，得到预处理玻碳电极；

（2）纳米金修饰玻碳电极的制备：将预处理玻碳电极放入0.30mol/L氯金酸水溶液中，室温下浸泡3~5h，取出后用水洗涤，再放入质量百分浓度为15~20%的柠檬酸钠溶液中浸泡5 h，取出后用水洗涤，自然干燥，即得纳米金修饰玻碳电极；