[发明专利]一种生物工程脱细胞真皮基质的制备及用途

权利要求书

1.一种生物工程脱细胞真皮基质的制备方法，具体步骤如下：

(1)对猪的皮肤进行预处理后得到真皮层皮片；

(2)全程使用包含一种或多种真皮结构保护剂的混合保护液；

(3)采用高静压技术预分离真皮组织内的细胞；

(4)采用含DNA酶和去垢剂的保护液去除残余细胞核和松散破碎细胞片；

(5)在真皮基质混合保护液进行漂洗去除多余的生物酶和细胞残留；

(6)获得具有正常胶原纤维的三维结构及排列极性的带有生物特性的脱细胞真皮层皮片；

所述混合保护液由RPMI-1640培养基添加硫酸软骨素、透明质酸、甘油、新霉素组成，并需调节pH值与渗透压到适宜值；其中所述硫酸软骨素的浓度为30-80g/L；所述透明质酸的浓度为10-50g/L；所述甘油的浓度为100-500g/L；所述新霉素的浓度为5-10mg/L，调节pH值至6.8-7.2之间，渗透压为350-450mOsm；

所述的高静压压力条件为400-600MPa，高静压频率为5～10次，每次为2～5分钟。

2.如权利要求1所述的制备方法，步骤(2)中取猪背部皮，经清洗去毛后，留取厚度为0.3-0.5mm，宽度为1-5cm的中厚真皮皮片备用。

3.如权利要求1所述的制备方法，所述去垢剂包括聚乙二醇、Pluronic、十二烷基硫酸钠、十二烷基肌氨酸钠、树胶、海藻酸钠、环糊精、CHAPS中的一种或多种作为组合。

4.如权利要求1所述的制备方法，其中在真皮基质混合保护液中漂洗的时间为3～8小时。

5.如权利要求1所述的制备方法，所述DNA酶时的浓度为2000-4000U/ml，DNA酶的脱细胞核时间为3-6小时，处理温度为15-30℃。

6.如权利要求3所述的制备方法，其中所述去垢剂为Pluronic F68，浓度为0.1-5％，使用时间为4小时。

7.如权利要求3所述的制备方法，其中所述去垢剂为十二烷基肌氨酸钠，浓度为0.1-5％，使用时间为6小时。