[发明专利]一种用于内源性氨基酸检测的血浆样品前处理方法

权利要求书

1.一种用于内源性氨基酸检测的血浆样品前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）血浆样品的预处理

血浆样品经一次离心后取上层血浆，将血浆与体积分数为5%的酸按体积比1:1混合；经 涡旋、超声、二次离心后，取上清液，作为上样溶液；一次离心的离心力介于3000-5000g，二 次离心的离心力介于13000-18000g；

2）固相吸附剂处理

将固体吸附剂装填于固相小柱中，规格为100mg的固体吸附剂装填1mL的小柱；所述固 体吸附剂为硅胶键合的C1-30的烷基颗粒，固体吸附剂的粒径为5~100um，孔径为60~300 nm，比表面积为50~800m²/g；使用前采用有机溶剂活化，再加入含有机溶剂和酸的水溶液 进行平衡，所述含有机溶剂和酸的水溶液为含有体积比为5%的有机溶剂和体积比为0.1%的 酸的水溶液；

3）氨基酸组分的选择性洗脱

上样后采用酸化的有机溶剂水溶液为洗脱剂，酸化的有机溶剂水溶液中体积比为有机 溶剂∶水∶酸=10-30∶89.9-69.9∶0.1；加入洗脱剂后收集所有的洗脱液馏分；

4）样品浓缩复溶检测

收集到的洗脱液馏分浓缩至干后重溶于0.1moL/L的盐酸中，制成待测样品，适用于采 用衍生化检测方法或非衍生化检测方法。

2.根据权利要求1所述的一种用于内源性氨基酸检测的血浆样品前处理方法应用于检 测氨基酸，其特征在于：所述待测样品适用于采用衍生化检测方法或非衍生化检测方法；

衍生化检测方法：待测样品用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯衍生后，用液 质联用的方法进行检测；液相色谱流动相条件包括衍生流动相A和衍生流动相B：衍生流动 相A为含20mM甲酸铵、0.5%甲酸、1%乙腈的水溶液，衍生流动相B为含1.6%甲酸的乙腈溶液； 流速为0.45mL/min，柱温45℃，色谱柱：XselectHSST32.1×100mm2.5um粒径色谱柱；

非衍生化检测方法：待测样品直接用液质联用方法进行检测；液相色谱流动相包括非 衍生流动相A和非衍生流动相B：非衍生流动相A为含10mM甲酸铵、0.2%甲酸、1%乙腈的水溶 液，非衍生流动相B为含1mM甲酸铵、0.2%甲酸的乙腈溶液；流速为0.40mL/min，柱温35℃，色 谱柱为XAmide4.6×150mm5μm100A色谱柱。

3.根据权利要求1所述的一种用于内源性氨基酸检测的血浆样品前处理方法，其特征 在于：血浆样品的预处理、固相吸附剂处理、氨基酸组分的选择性洗脱过程中所用的酸是相 对应的，所述酸为甲酸、乙酸或盐酸中的一种或多种；血浆样品的预处理、固相吸附剂处理、 氨基酸组分的选择性洗脱过程所用的有机溶剂是相对应的，所述有机溶剂为异丙醇、甲醇、 乙醇、乙腈、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、醋酸丁酯中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种用于内源性氨基酸检测的血浆样品前处理方法，其特征 在于：所述处理血浆样品的体积介于10uL-500uL。