[发明专利]以TNS-MWCNT复合材料为抗体和示踪标记物载体的电化学免疫传感器构建方法

权利要求书

1.一种以TNS-MWCNT复合材料为抗体和示踪标记物载体的电化学免疫传感器构建方 法，其特征在于，包括如下步骤：

①NH₂-TNS-MWCNT复合材料的制备：

TNS-MWCNT的制备：称取50mg的MWCNTs分散在40mL的异丙醇中超声20min，随后加入 50μL二亚乙基三胺，搅拌均匀后，加入3.6mL异丙醇钛，再次搅拌均匀后将混合液转移至 反应釜中，于180－220℃反应18－28h；反应结束后，取出，冷却至室温，黑色沉淀物经过离 心分离、洗涤、干燥，即得到复合纳米材料TNS-MWCNT；

氨基化TNS-MWCNT的制备：将120mgTNS-MWCNT与20mL乙醇、1mL28%氨水和5mL3- 氨丙基三乙氧基硅烷混合后，机械搅拌12h，离心分离，弃去上清液，所得固体残留物洗涤、 干燥后，室温下储存备用，记为NH₂-TNS-MWCNT；

②示踪标记物的制备：

HRP︱NH₂-TNS-MWCNT︱Ab2示踪标记物的制备：将2mgBS³溶解在0.5mL0.02M的PBS 缓冲液中获得溶液A，然后将3mgNH₂-TNS-MWCNT分散于溶液A中，搅拌下加入400μL2.5 mg·mL^-1的辣根过氧化物酶水溶液并在室温下孵育30min，然后加入20μL含1.0mg·mL ^-1信号抗体Ab2的PBS缓冲液，4℃下搅拌4h，离心分离，所得沉淀物用洗涤缓冲液洗涤并用 封闭缓冲液在室温下封闭30min，最后用洗涤缓冲液洗涤后，分散于含0.1%牛血清蛋白的 1.0mLPBS缓冲液中，备用，记为HRP︱NH₂-TNS-MWCNT︱Ab2；

③免疫传感器的构建：

将6mg步骤①所得NH₂-TNS-MWCNT分散于1mL含1%Nafion溶液中，超声20min以得 到均匀的分散液，取5μL分散液滴加在预处理好的玻碳电极表面，室温下自然晾干；然后在 玻碳电极表面滴加10μL含2mg·mL^-1BS³的PBS缓冲液并在室温下孵育1h，随后滴加5μ L0.5mg·mL^-1的捕获抗体Ab1，室温下孵育60min，浸入PBS缓冲液中洗涤3min，然后将 该玻碳电极用5μL封闭缓冲液孵育30min，再分别用洗涤缓冲液和PBS缓冲液洗涤3min， 即得电化学免疫传感器。

2.如权利要求1所述以TNS-MWCNT复合材料为抗体和示踪标记物载体的电化学免疫传 感器构建方法，其特征在于，在步骤②和③中，所述洗涤缓冲液为：含0.05%Tween20的 PBS缓冲液；所述封闭缓冲液为：含2%牛血清蛋白的PBS缓冲液。