[发明专利]一种分离纯化替考拉宁的方法

说明书

本发明提供了一种分离纯化替考拉宁的方法，具体步骤包括：陶瓷膜过滤替考拉宁发酵液；大孔吸附树脂柱层析；阳离子交换树脂柱吸附、洗脱；洗脱液纳滤浓缩；反向层析树脂柱吸附、洗脱；活性炭脱色；脱色液纳滤浓缩；超滤过滤，纳滤浓缩；冻干。该方法克服了替考拉宁现有提取技术的不足，提高了替考拉宁的纯度。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种分离纯化替考拉宁的方法。

背景技术

替考拉宁(Teicoplanin)为替考游动放线菌发酵产生的一组糖肽类抗生素，是继国际公认的抗耐药菌抗生素万古霉素后开发的另一种抗耐药菌糖肽类抗生素，主要对革兰氏阳性需氧和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的仍具有对多重耐药性金黄色葡萄球菌和肠球菌有抗菌活性的药物之一。

替考拉宁是游动放线菌发酵生产的由多种成分组成的混合物，结构复杂，对热、酸、碱稳定性差，生产过程中容易引起失活和分解，且发酵液中替考拉宁的含量较低，一般都需要较复杂的分离纯化过程。

专利CN101302248A中提出了向替考拉宁浓缩液中添加丙酮进行结晶或盐析结晶的方法。但是该项专利中提及的工艺繁琐，生产设备投入大，超滤浓缩会增加浓液杂质浓度，并且所使用的有机溶剂易污染环境，盐析结晶过程中还会容易含有金属盐离子，引入杂质，降低样品纯度与效价。

替考拉宁是5个化学结构十分相似化合物Teicoplanin A₂(TA_2-1、TA_2-2、TA_2-3、TA_2-4、TA_2-5)和去酰基葡糖胺Teicoplanin A₃(T-A₃)组成的混合物，结构复杂，对热、酸、碱稳定性差，生产过程中容易引起失活和分解，且发酵液中替考拉宁的含量较低，目前采用的分离纯化过程较复杂。替考拉宁主要的提取方法有：溶媒萃取法、吸附法、色谱法。溶媒萃取法由于溶剂使用量大，分离纯化效果差，制备的最终产品纯度低，所以目前该法已经很少采用。色谱法，由于使用的色谱填料昂贵，生产成本高，不利于工业化运用。吸附法采用的主要介质为大孔吸附树脂、活性炭等，其原料易得、价格低廉，替考拉宁纯化效果好，已成为替考拉宁提取的主要方法。

替考拉宁单组份的结构式

发明内容

本发明的目的是提供一种分离纯化替考拉宁的方法。该方法克服了替考拉宁现有的提取技术的不足，提供一种工艺简便，经济，安全，低污染的替考拉宁提取方法。

本发明主要包括如下步骤：

1)陶瓷膜过滤替考拉宁发酵液；

2)大孔吸附树脂柱层析；

3)阳离子交换树脂柱吸附、洗脱；

4)洗脱液纳滤浓缩；

5)反向层析树脂柱吸附、洗脱；

6)活性炭脱色；

7)脱色液纳滤浓缩；

8)超滤过滤，纳滤浓缩；

9)冻干。

具体的包括如下操作步骤：

1)陶瓷膜过滤替考拉宁发酵液