[发明专利]一种耐高温酸性葡萄糖氧化酶GODL8及其基因和应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种耐高温酸性葡萄糖氧化酶GODL8及其基因和应用。本发明提供了一种来源于黑曲霉Aspergillus niger L75的葡萄糖氧化酶GODL8，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或3所示，且本发明提供了编码上述葡萄糖氧化酶的编码基因godL8，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4或6所示。本发明的葡萄糖氧化酶具有以下性质：最适pH 4.5，最适温度45℃，具有较好的热稳定性。作为一种新型的酶制剂，可应用于饲料、食品、医药等行业。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种耐高温酸性葡萄糖氧化酶GODL8及其基因、包含该基因的重组载体和应用。

背景技术

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,E.C.1.1.3.4,GOD)在有氧条件下能专一性地催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢。早在1904年人们就发现了GOD，但没有引起足够的重视。1928年Muller首先从黑曲霉的无细胞提取液中发现GOD。Kusai(1960)等、Pazur和Swobod-da(1964)分别从青霉素和黑曲霉中提纯GOD。Petruccioli(1995)等用青霉素的突变株生产出GOD。我国自1986年开始研究GOD的制备提纯工艺，1998年正式投入生产。

葡萄糖氧化酶的研究和生产已经过了几十年的历程，但目前对GOD的研究报道主要集中在其应用于血糖的测定，在食品中用于啤酒、果汁等的脱氧保鲜以及改善面粉质量等等。农业部在1999年就将葡萄糖氧化酶作为允许使用的饲料酶制剂添加剂之一，其在动物生产及饲料保存方面有一定的使用效果。

食品加工工艺中部分糖蛋白分解后，还原糖的醛基和氨基酸的羧基会产生美拉德反应，使产品褐变。用GOD-过氧化氢酶组合系统处理食品，能将葡萄糖分子上的醛基转变为羧基，生成葡萄糖酸，消除美拉德反应。常应用于蛋品、马铃薯制品，果酱制品以及海鲜中，延长了产品的货架期。含有黄酮、亚油酸、亚麻酸等还原性物质的食品，如果汁、茶饮料、葡萄酒、啤酒、蛋黄酱、果酱等，存在氧会使还原性物质氧化，致使产品浑浊、沉淀、变色。加入适量GOD或GOD-过氧化氢酶复合物，可有效地保护食品中的还原性物质。GOD能阻止好氧菌生长繁殖，产生过氧化氢，起到杀菌作用。

GOD能专一氧化葡萄糖，故可用于测定各种食品和混合物中葡萄糖的含量。目前用固定化技术制成的GOD分析仪已用于测定发酵液的残糖量。据此原理制成的葡萄糖测定试剂盒，可定量测定果汁、饮料及牛奶等多种食品中葡萄糖的含量。GOD与葡萄糖反应生成葡萄糖酸的同时产生强氧化剂过氧化氢，能将面筋分子中的巯基(-SH)氧化为二硫键(-S-S-)，可取代对人体有致癌作用的溴酸钾，增强面筋强度和面团延展性，增大面包体积。尿糖试纸、血糖试纸测定糖含量的试剂已商品化，因操作简单、无毒、无害、易控制，已广泛应用于临床。

目前葡萄糖氧化酶虽然已经有商品出售，但是由于产量较低，生产成本高，使得其应用受到限制。因此开发酶活力高、性质优良及生产成本低的葡萄糖氧化酶就成了当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够应用的耐高温酸性葡萄糖氧化酶。

本发明的再一目的是提供编码上述耐高温酸性葡萄糖氧化酶的基因。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。

本发明的另一目的是提供一种制备上述耐高温酸性葡萄糖氧化酶的基因工程方法。

本发明的另一目的提供上述耐高温酸性葡萄糖氧化酶的应用。

本发明提供了一种耐高温酸性葡萄糖氧化酶GODL8，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。