[发明专利]鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法及其应用

说明书

本发明提供鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法及其应用，该方法包括应用原核表达系统表达的含IgE Fcε3‑4蛋白片段的融合蛋白免疫小鼠，随后通过杂交瘤方法制备鼠源抗人IgE单克隆抗体；其中，所述IgE Fcε3‑4蛋白片段为由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列在所述原核表达系统中表达的蛋白。所以方法与现有技术中所用的IgE Fcε2‑4或IgE Fcε3‑4的蛋白相比较，降低了抗原蛋白的纯化难度，从而提高了效率；原核表达抗原降低了抗体制备的成本。

技术领域

本发明涉及抗人IgE抗体技术领域，具体涉及一种鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法及其应用。

背景技术

近年来随着社会工业化的进程，环境污染越来越严重。与此同时，IgE介导的过敏性疾病的发病率也迅速增长，严重影响了人类的生存质量。据报道，约占世界人口的40％的人群处于超敏状态，世界卫生组织已将这类疾病列为21世纪重点防治的疾病之一。

IgE最早在1968年由世界卫生组织免疫球蛋白参考实验室正式提出，属于人类第五种免疫球蛋白。IgE是由B细胞分泌，并通过与嗜酸性粒细胞和肥大细胞表面的Fc受体结合，导致其脱颗粒释放炎性介质，从而引起过敏症状。IgE敏感可导致典型的过敏性疾病：哮喘、鼻炎、食物过敏、药物过敏和过敏性休克等。

目前国内检测人血清中IgE的产品较少，而且特异性较低，可重复性差。加之，国内科研所用检测人IgE及相关细胞免疫学实验所用的试剂大多购自国外，而且价格也昂贵，从而在某种程度上限制了该蛋白相关实验的进展。因此，需要一种特异性更强、重复性更高、生产成本更低的可检侧IgE的试剂。

生产检测抗IgE单克隆抗体的方法通常有杂交瘤技术、噬菌体抗体库技术及核糖体展示技术等。但作为检测试剂的研发使用最传统的杂交瘤技术即可，不仅可以降低生产成本，而且还可以降低单抗制备的技术难度。现有技术生产抗IgE单克隆抗体是采用IgE Fcε2-4或IgE Fcε3-4的全长抗原蛋白来免疫小鼠，但IgE Fcε2-4或IgE Fcε3-4的全长抗原蛋白纯化十分困难，并且这些抗原蛋白不亦在原核细胞中表达，无法有效降低抗体制备的成本。因此，本领域亟需一种纯化简便、成本的方法来生产特异性强，重复性高的抗人IgE单克隆抗体。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的之一在于提供一种鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法，所述方法可降低了抗原蛋白的纯化难度，从而提高了效率，并且可采用原核系统表达抗原蛋白，降低了成本。

本发明的另一目的在于提供一种鼠源抗人IgE单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合人IgE的生物活性片段，使其具有特异性强，可重复性好的特点。

本发明的另一目的在于提供编码所述鼠源抗人IgE单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合人IgE的生物活性片段的基因及含该基因的载体或细胞。

本发明的另一目在于提供产生所述鼠源抗人IgE单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合人IgE的生物活性片段的方法。

本发明的另一目的在于提供一种检测H7N9病毒的试剂盒。

为此，一方面，本发明提供一种鼠源抗人IgE单克隆抗体的制备方法，所述方法包括应用原核表达系统表达的含IgE Fcε3-4蛋白片段的融合蛋白免疫小鼠，随后通过杂交瘤方法制备鼠源抗人IgE单克隆抗体；其中，所述IgE Fcε3-4蛋白片段为由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列在所述原核表达系统中表达的蛋白。

在本发明一具体实施方式中，所述含IgE Fcε3-4蛋白片段的融合蛋白还含有载体pET32(+)表达的蛋白。该载体pET32(+)用于携带SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

在本发明一具体实施方式中，其中，所述由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列是以SEQ ID NO:6及SEQ ID NO:7为引物，及以CRL8033cDNA为模板扩增所得。