[发明专利]一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法

权利要求书

1.一种氮气加压乙醇置换提取洋葱细胞中异蒜氨酸的方法，其特征在于提取步骤依次是：洋葱预处理、氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸、氮气保护减压蒸馏浓缩提取液、氮气氛围阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖、重结晶得到异蒜氨酸；具体方法如下：

（1）洋葱预处理

将洋葱去掉外皮，切头去尾，一切两半，立即用去离子水洗净切口，避免切口酶残留，分成瓣；按照洋葱质量份/无水乙醇体积份为1 /3的比例，将洋葱称重后，放入不锈钢提取罐；

（2）氮气加压乙醇置换提取异蒜氨酸

向不锈钢提取罐加入无水乙醇，密封，用氮气保护；用氮气钢瓶的减压阀调节氮气压力至0.2～0.7 MPa，打开提取罐进气阀，将压力为0.2～0.7 MPa的氮气通入提取罐中，使提取罐压力达到0.2～0.7 MPa，保压时间0.5～2.5h，打开提取罐上部放气阀，泄压至0.1MPa后，将提取液从下部取样阀中全部放出，迅速转移至旋转蒸发仪中，用氮气保护；

（3）氮气保护减压蒸馏浓缩提取液

用旋转蒸发仪减压蒸馏浓缩提取液，真空度0.08MPa，温度50℃，旋转蒸发仪中通入氮气隔绝空气，至乙醇溶剂回收约95%后，停止浓缩，得到粘稠状黄色液体；

（4）氮气氛围阳离子交换树脂分离异蒜氨酸和多糖

将粘稠状黄色液体20g加200mL超纯水溶解后抽滤，去除包括纤维的大部分不溶性物质得淡黄色清液；量取200mL处理好的732树脂装柱，用超纯水冲洗至流出液无色；再将淡黄色清液用HCl调节至pH为2，在氮气氛围下以0.5BV/h的流速上样；之后用pH为3～4的盐酸溶液以1BV/h的流速冲洗至莫氏试剂检测呈阴性，盐酸溶液冲洗期间要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有氨基酸泄露；再改用清水清洗柱子至pH为7，清水清洗期间仍然要用茚三酮溶液检测在洗糖的过程中是否有异蒜氨酸泄露；之后用0.5 mol/L氨水溶液将异蒜氨酸洗脱；

（5）重结晶得到异蒜氨酸

将氨水洗脱液在氮气保护下减压蒸馏，真空度0.08MPa，温度50℃，得到浓缩液，用超纯水溶解浓缩液，再次过滤上柱，用氨水洗脱，再次减压蒸馏，加无水乙醇，重结晶得到纯品异蒜氨酸。