[发明专利]一种利用葡萄籽提取物制备低聚原花青素的方法

权利要求书

1.一种利用葡萄籽提取物制备低聚原花青素的方法，其特征在于具体的工艺步骤如下：

(1)制备原花青素乙醇溶液

称取一定量葡萄籽提取物，按照葡萄籽提取物质量/无水乙醇体积比为1∶50～100kg/L的比例，在搅拌下将其加入到无水乙醇中，处理10～30min后抽滤，分别收集滤渣和滤液，对收集的滤渣，主要含聚合度超过10的高聚体原花青素，用于制备饲料抗氧化剂；对收集的滤液，即为原花青素乙醇溶液，用于下一步制备初分离浓缩液；

(2)制备初分离浓缩液

第(1)步完成后，将第(1)步收集的原花青素乙醇溶液泵入真空浓缩器中，在温度为60～80℃、真空度为0.06～0.08MPa的条件下进行真空浓缩，直至浓缩液体积降低至原花青素乙醇溶液体积的1/10～1/20时止，分别收集真空浓缩液和真空浓缩冷凝液，对收集的真空浓缩冷凝液，用于再次溶解葡萄籽提取物；对于收集的真空浓缩液，按照该浓缩液体积/纯净水体积之比为1∶4～8L/L的比例加入纯净水，搅拌均匀后用截留分子量为1000～5000Da的超滤膜在表压为0.05～0.2MPa的条件下进行超滤，直至超滤截留液/超滤滤过液的体积比为1∶6～10L/L时止，分别收集超滤滤过液和超滤截留液，对收集的超滤截留液，即为初分离浓缩液，主要由低聚体原花青素组成，用于后续步骤制备低聚原花青素；对收集的超滤滤过液，主要含无机离子、单糖、寡糖和氨基酸，泵入生化处理池进行生化处理，达标后排放；

(3)装配MCI GEL树脂层析分离系统

将市售MCI GEL树脂CHP20P或CHP 2MG Y先用体积分数为5～10％的乙醇溶液分散，再用恒流泵泵入中压层析柱中，其中MCI GEL树脂CHP20P或CHP 2MG Y质量与体积分数为5～10％的乙醇溶液体积之比为1∶5～10kg/L，然后将中压层析柱分别与恒流泵和在线紫外检测器连接，就装配出CHP20P或CHP 2MG Y树脂层析分离系统；

(4)制备低聚原花青素浓缩液

第(3)步完成后，将第(2)步收集的初分离浓缩液泵入MCI GEL树脂CHP20P或CHP 2MG Y层析分离系统，泵入的初分离浓缩液体积与MCI GEL树脂CHP20P或CHP 2MG Y质量之比为1∶10～20L/kg，泵完初分离浓缩液后，再泵入体积分数为5～10％的乙醇溶液进行洗脱，泵入量为树脂柱体积的6～8倍，泵入流速为树脂柱体积(BV)的3～6倍/小时，分段收集洗脱液，将第1～2BV、第4.1～5BV和第7.1～8BV的洗脱液合并，第1～2BV、4.1～5BV和第7.1～8BV的洗脱液均为体积分数为5～10％的乙醇溶液，用于下批次洗脱；第2.1～4BV的洗脱液含高聚原花青素，用于制备高聚原花青素冻干粉；第5.1～7BV的洗脱液含低聚原花青素，用于制备低聚原花青素冻干粉，洗脱完原花青素的MCI GEL树脂CHP20P或CHP 2MG Y，可用于下批次分离低聚原花青素和高聚原花青素；

(5)制备低聚原花青素冻干粉

第(4)步完成后，将第(4)步收集的第5.1～7BV的洗脱液泵入截留分子量为200～600Da的纳滤膜，在表压为0.2～0.5MPa的条件下进行纳滤，直至纳滤截留液/纳滤滤过液的体积比为1∶6～10L/L时止，分别收集纳滤截留液和纳滤滤过液，对收集的纳滤滤过液，与第(4)步分段收集的第1～2BV、4.1～5BV和第7.1～8BV的洗脱液合并，用于洗脱下批次原花青素；对收集的纳滤截留液，泵入超低温真空浓缩器中，在温度为20～40℃、真空度为0.0086～0.0098MPa的条件下进行真空浓缩，直至无乙醇浓缩出时为止，分别收集真空浓缩液和真空浓缩冷凝液，对收集的真空浓缩液，在真空度为30～50Pa、温度为-50～-40℃的条件下冷冻干燥24～30小时，就制备出低聚原花青素冻干粉；对收集的真空浓缩冷凝液，用于制备无水乙醇；

(6)制备高聚原花青素冻干粉

第(4)步完成后，将第(4)步收集的第2.1～4BV的洗脱液泵入截留分子量为5000～10000Da的超滤膜，在表压为0.05～0.2MPa的条件下进行超滤，直至超滤截留液/超滤滤过液的体积比为1∶6～10L/L时止，分别收集超滤滤过液和超滤截留液，对收集的超滤滤过液，与第(4)步分段收集的第1～2BV、4.1～5BV和第7.1～8BV的洗脱液合并，用于洗脱下批次原花青素；对收集的超滤截留液，泵入超低温真空浓缩器中，在温度为20～40℃、真空度为0.0086～0.0098MPa的条件下进行真空浓缩，直至无乙醇浓缩出时为止，分别收集真空浓缩液和真空浓缩冷凝液，对收集的真空浓缩液，在真空度为30～50Pa、温度为-50～-40℃的条件下冷冻干燥24～30小时，就制备出高聚原花青素冻干粉；对收集的真空浓缩冷凝液，用于制备无水乙醇。