[发明专利]用于直肠癌诊断的miRNA生物标志物及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测，涉及用于人直肠癌诊断的microRNA生物标志物及检测试剂盒。

背景技术

直肠癌是常见的恶性肿瘤之一。美国和加拿大等西欧及北美发达国家直肠癌的发病率达 35/10万～50/10万，其发病率及病死率在恶性肿瘤中仅次于肺癌而居第2位。有资料显示，中 国直肠癌的发病率为15.7/10万，居恶性肿瘤发病的第4～6位，而且有逐渐上升的趋势。中国 2005年直肠癌的发病数和病死数分别达17.2万和9.9万，已超过美国。早期直肠癌多无症状， 大多数患者确诊时已属晚期，直肠癌根治术后的5年生存率仅为50.21％。癌胚抗原(CEA) 是最早发现的直肠癌血清肿瘤标志物，但CEA在大多数恶性肿瘤患者血清中均有不同程度的 上调，特异性较低，对直肠癌的早期诊断价值不高。因此，寻找理想的特异度强和灵敏度高 的肿瘤标志物是提高肿瘤早期诊断的重要手段之一。

MicroRNA(miRNA)是最新发现的长约18-25个核苷酸的非编码小分子RNA，在进化 上高度保守，数量约占基因组的1％，现已普遍认为miRNA与人类疾病的发生有密切的联系， 其发现为人们在基因水平认识癌症提供了新思路。MiRNA在转录或转录后水平负调控蛋白质 编码基因的表达：通过与其靶基因mRNA非完全互补或近似完全互补结合，导致mRNA降 解或抑制其翻译。人类基因组约30％的基因受miRNA调控，在细胞的生长、增殖、分化和 凋亡等多方面发挥着重要的生物调节作用。研究已证实miRNA的异常调控与肿瘤形成及进 展关系密切。MiRNA的靶基因多数是参与转录、信号转导、肿瘤发生等生物学效应的基因。 随着miRNA与癌症关系的不断深入研究，发现miRNA并不只是参与了癌症形成的初期阶段， 还涉及到疾病病情变化、对药物的敏感性、患者预后等等多方面。随后基于miRNA的癌症 基因治疗顺势登上舞台，凸显出很大的研究价值。

迄今为止，尚未寻找到可靠的microRNA生物标志物用于诊断人直肠癌。

发明内容

本发明的目的在于提供用于直肠癌诊断的microRNA生物标志物及检测试剂盒。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一组用于人直肠癌诊断的microRNA生物标志物，包括：hsa-miR-381-3p、hsa-miR-384、 hsa-miR-30a-3p、hsa-miR-424-5p和hsa-miR-26a-5p；所述hsa-miR-381-3p的核苷酸序列如 SEQIDNO.1所示；所述hsa-miR-384的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述hsa-miR-30a-3p 的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述hsa-miR-424-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示； 所述hsa-miR-26a-5p的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。

进一步地，所述microRNA生物标志物为人血清microRNA生物标志物。

一组人直肠癌诊断用microRNA引物、探针的组合，包括hsa-miR-381-3p引物、探针； hsa-miR-384引物、探针；hsa-miR-30a-3p引物、探针；hsa-miR-424-5p引物、探针；hsa-miR-26a-5p 引物、探针；所述引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物；hsa-miR-381-3p 的反转录引物序列如SEQIDNO.6所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.7所示，定量 PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示；hsa-miR-384的反转录引物序列如SEQIDNO.8所示， 定量PCR前引物序列如SEQIDNO.9所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示； hsa-miR-30a-3p的反转录引物序列如SEQIDNO.10所示，定量PCR前引物序列如 SEQIDNO.11所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示；hsa-miR-424-5p的反转录 引物序列如SEQIDNO.12所示，定量PCR前引物序列如SEQIDNO.13所示，定量PCR后 引物序列如SEQIDNO.16所示；hsa-miR-26a-5p的反转录引物序列如SEQIDNO.14所示， 定量PCR前引物序列如SEQIDNO.15所示，定量PCR后引物序列如SEQIDNO.16所示； 各microRNA探针的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示。