[发明专利]一种PHA合酶和编码基因及其制备和应用

权利要求书

1.一种来源于甲基杆菌属(Methylobacterium sp.在中国北纳菌种保藏中心的资源编号为：BNCC195932)PHA合酶的基因(phaC)，其核苷酸序列具有如下特征之一：

1)具有序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列的1-1818或1-1824或1-1842DNA序列；

2)编码SEQ ID NO.2从氨基端开始的第1-607位或或第1-613位氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

3)对序列表中SEQ ID NO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列的1-1821或1-1824或1-1842DNA序列进行一个或二个以上核苷酸取代、缺失或添加中的一种或二种以上而得到的编码具有PHA合酶活性的核苷酸序列。

2.一种权利要求1所述的PHA合酶基因编码的PHA合酶，其氨基酸序列具有如下特征之一：

1)具有序列表中SEQ ID NO.2从氨基端开始的第1-607位或第1-613位氨基酸残基序列；

2)对序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列从氨基端开始的第1-607位或第1-613位进行一个或二个以上氨基酸取代、缺失或添加中的一种或二种以上而形成的具有PHA合酶活性的氨基酸序列。

3.一种权利要求2所述的PHA合酶的制备方法，其特征在于：将权利要求1所述的PHA合酶基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的PHA合酶。

4.按照权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的重组表达PHA合酶的表达载体，是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体。

5.按照权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述宿主细胞是用于重组表达PHA合酶的重组菌或转基因细胞系，是指大肠杆菌宿主细胞(如Escherichia coli BL21、Escherichia coli JM109、Escherichia coli DH5α等)、酵母菌宿主细胞(如Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastoris、Kluyveromyces lactis等)、枯草杆菌宿主细胞(如Bacillus subtilis R25、Bacillus subtilis 9920等)、乳酸菌宿主细胞(如Lactic acid bacteria COCC101等)、放线菌宿主细胞(如Streptomyces spp.等)、丝状真菌宿主细胞(如Trichoderma viride，Trichoderma reesei，Aspergillus niger、Aspergillus nidulans等)、昆虫细胞(如Bombyx mori，Antharaea eucalypti等)，哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞CHO，幼小仓鼠 肾脏细胞BHK、中国仓鼠肺细胞CHL等)中的一种。

6.一种如权利要求2所述PHA合酶的应用，其特征在于：

该酶可催化合成聚羟基脂肪酸酯(PHA)。

7.按照权利要求6所述的PHA合酶的应用，其特征在于：

用于合成聚羟基脂肪酸酯(PHA)时采用的原料为乙酰辅酶A。