[发明专利]用于对同一组织切片进行多次免疫染色的装置和方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学生物实验装置和方法，尤其涉及一种用于对同一组织切片进行多次免疫染色的装置和方法。

背景技术

免疫染色是利用抗原与抗体特异性结合的原理，检测特定蛋白（抗原）的表达情况，是发现机体在生理或病理状态下功能变化最常用的检测方法之一，最常用的是免疫组织化学染色和免疫荧光染色。常规方法是对一张组织切片进行一种抗原标记的染色方法，要研究多种抗原的表达情况则需要多张组织切片。如果对极少量的组织标本（如细针穿刺标本）进行多种抗原表达情况的研究，常规免疫染色方法由于受标本量的限制而难以实现。因此，有必要开发一种能对同一组织切片进行多次免疫染色的装置和方法，以节约组织标本，满足诊断需要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术难以对极少量的组织标本进行多种抗原表达状况研究，提供一种用于对同一组织切片进行多次免疫染色的装置和方法。

本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：对同一组织切片进行多次免疫染色采用组织切片承载装置和多次染色法。

所述组织切片承载装置，包括带凹槽载玻片和盖玻片两部分，所述带凹槽载玻片由高透明性的无色玻璃制成，中央有至少一个凹槽，凹槽的形状优选于立方形，凹槽底光滑平整，凹槽底厚度为（1.0±0.2mm），凹槽深度为0.5mm至3mm，根据拟匹配的所述盖玻片大小，将凹槽制作成能水平放入盖玻片，并使盖玻片与凹槽四周侧壁间有约1mm宽的缝隙为宜。所述盖玻片为市售常规盖玻片，厚度为0.13-0.17mm，有多种不同规格，由高透明玻璃制成。带凹槽载玻片的凹槽需要采用目前常规的方法，如涂抹多聚赖氨酸等增加组织与载玻片凹槽底的粘附性，以避免组织切片脱离载玻片。组织切片置于带凹槽载玻片的凹槽内底部中央，盖玻片置于组织切片上方。

执行所述多次染色法前，先进行常规的染色前准备，包括石蜡包埋组织的切片（厚度为4~6μm）、漂片，将组织切片置于带凹槽载玻片的凹槽底部中央，烤片、脱蜡、水化、抗原修复等一系列常规步骤（冰冻切片则切片后即可进行染色），将盖玻片置于组织切片上方，然后对组织切片进行依次循环的染色、拍照、清洗、再染色、再拍照、再清洗的多次染色。所述染色，即依次将试剂添加到盖玻片与带凹槽载玻片的凹槽壁之间的缝隙处，使试剂通过表面张力的作用扩散而浸没组织切片，在试剂作用组织切片一段时间后，将载玻片竖直放置，凹槽内的试剂则流出，用吸水纸吸取而大部分清除。按试剂盒说明书操作，依次添加第一种第一抗体及相应的第二抗体等，至显色完成后（不进行苏木精复染细胞核和封片），用缓冲液终止显色，将载玻片竖直放置，用吸水纸吸去大部分残留缓冲液，即可在显微镜下进行所述拍照。所述拍照，即将带有组织切片的组织切片承载装置放到显微镜下，使用图像采集装置采集组织切片染色后的完整照片（放大200~400倍）。所述拍照完成后，进行所述清洗，即添加试剂将显色产物完全清除，可用热的磷酸盐缓冲液（约60℃）去除结合到组织切片的第一抗体和第二抗体，根据显色系统的不同，用相应的试剂溶解并清除结合于组织切片的显色产物。在成功完成所述清洗后，组织切片恢复至染色前的颜色，即可进行所述再染色。所述再染色，即按照说明书操作，依次添加第二种第一抗体及相应的第二抗体等，至显色完成后，重复与所述染色相同的操作，进行所述再拍照、所述再清洗，再按上述循环添加第三种第一抗体、第四种第一抗体等，直至完成拟研究的全部抗原表达的研究。按照所述多次染色法能对同一组织切片进行3次至20次染色。然后，作为染色质量控制方法，重复第一种第一抗体的染色（目的是评价在多次染色过程中是否存在抗原丢失现象，若抗原丢失超过20%，需考虑减少染色次数，即减少对同一组织切片的染色次数），拍照后，进行常规苏木素-伊红染色，封片并进行拍照。在整个染色过程中，始终保持盖玻片覆盖于组织切片表面，不能中途移开。若组织切片在整个操作过程中的任何时候离开最初所在位置，则可能导致实验失败。将多次染色后所获得的照片通过计算机软件系统进行比对分析，可获得组织切片上每一个细胞的相应抗原表达谱。