[发明专利]一种藏红花酸糖基转移酶及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了一种藏红花酸糖基转移酶及其编码基因与应用。本发明所提供的藏红花酸糖基转移酶，为如下a1)或a2)或a3)或a4)：a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；a2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；a3)氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白质；a4)将a1)或a2)或a3)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有藏红花酸糖基转移酶活性的蛋白质。实验证明，本发明所提供的藏红花酸糖基转移酶，具有以藏红花酸为底物的糖基转移酶活性，可顺序糖基化藏红花酸形成藏红花素苷5和藏红花素苷3，具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种藏红花酸糖基转移酶及其编码基因与应用。

背景技术

藏红花又叫番红花、西红花，为多年生的鸢尾科植物番红花(Crocus sativus L.)的干燥柱头，是我国的一种名贵中药。藏红花总苷是从藏红花中提取的色素类化合物，其主要成分为藏红花素(crocus)、藏红花酸(crocetin)及其衍生物，其中藏红花素是藏红花酸与不同糖结合而成的一系列酯苷，是藏红花的主要活性成分之一，具有抗血小板聚集、抗血栓形成、抗心肌缺血、抗癌等多种药理作用，而且几乎无毒副作用。

现有研究表明，藏红花酸糖基转移酶具有糖基化藏红花酸形成藏红花素的功能，如2004年Morgan等从藏红花花柱中分离发现UGTCs2基因(GeneID：AY36026)，其原核表达的粗蛋白具有糖基化藏红花酸形成藏红花素的功能，因此将UGTCs2基因注释为藏红花酸糖基转移酶的编码基因；再如2012年Mai Nagatoshi从栀子细胞中分离发现UGT75L6基因(GeneID：AB555731)和UGT94E5基因(GeneID：555739)，UGT75L6基因原核表达的蛋白粗提物具有顺序糖基化藏红花酸形成藏红花素苷5、藏红花素苷3和藏红花素苷4的功能，UGT94E5基因原核表达的蛋白粗提物具有糖基化藏红花素苷5形成藏红花素苷2和藏红花素苷1的功能，因此，将UGT75L6基因和UGT94E5基因也均注释为藏红花酸糖基转移酶的编码基因。但截至目前，仍无法获得高纯度的藏红花酸糖基转移酶。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何获得高纯度的藏红花酸糖基转移酶。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种蛋白质。

本发明所提供的蛋白质，名称为蛋白质UGTCs4，所述蛋白质UGTCs4可为如下a1)或a2)或a3)或a4)：

a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；

a2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

a3)氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白质；

a4)将a1)或a2)或a3)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有藏红花酸糖基转移酶活性的蛋白质。

其中，序列表中序列2可由459个氨基酸残基组成；序列表中序列4可由492个氨基酸残基组成。

为了使a1)中的蛋白质便于纯化，可在序列表中序列2所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1、标签的序列