[发明专利]一种靶向CD47与PD-L1的双功能融合蛋白

说明书

一种靶向CD47与PD‑L1的双功能融合蛋白，属于生物医药领域，解决抗PD‑1/PD‑L1治疗对低免疫原性的肿瘤效果差、抗CD47治疗靶向性差的问题。该融合蛋白由二硫键链接的CD47结合部分和PD‑L1结合部分组成，既能阻断CD47与SIRPα的结合，又能阻断PD‑L1与PD‑1的结合，既能在天然性免疫中起到激活巨噬细胞吞噬肿瘤细胞、促进抗原递呈作用，又能在获得性免疫中起到促进肿瘤特异性T细胞活化的作用，同时具有更小的血液毒性，该融合蛋白比单独使用抗PD‑L1或抗CD47治疗具有更好的抗肿瘤疗效和血液安全性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种靶向CD47分子与PD-L1分子的重组融合蛋白。

背景技术

癌细胞的“免疫逃逸”被认为是肿瘤发生、发展和抗药的主要机制。肿瘤一般通过直接或间接抑制T细胞的信号来保护自己躲过免疫系统的清除。肿瘤的免疫检查点疗法（immune chenkpoint therapy）是一类通过共抑制或共刺激信号等一系列途径调节T细胞活性来提高抗肿瘤免疫应答的治疗方法。

免疫检查点通过免疫应答过程中的共刺激和共抑制分子，发出“打开”或“关闭”免疫应答的信号，在调节T细胞应答的幅值与持续时间和维持自身耐受方面具有重要作用，防止损伤自身组织。目前已发现的免疫检查点分子有PD-1/PD-L1、CD47/SIRPα、CTLA-4/CD80/CD86等。

（1）PD-1/PD-L1

PD-1（Programmed Cell Death Protein 1，程序性细胞死亡蛋白1）是一种细胞表面受体，表达于T细胞和前B细胞表面，在活化的T细胞上表达上调，能与PD-L1和PD-L2两种配体结合。PD-1是一种具有负调控功能的免疫检查点蛋白，能够防止T细胞的活化，在降低自身免疫、促进免疫耐受上起着重要作用。PD-1的功能通过两种途径实现，一是促进淋巴结中抗原特异性T细胞的凋亡，二是减少调控性T细胞（Treg，也叫抑制性T细胞）的凋亡。

PD-L1（Programmed Death-Ligand 1，程序性死亡配体1）是PD-1的配体之一，也是一种跨膜蛋白，主要表达于胎盘、心脏、肝脏、肺、肾、骨骼肌和少数造血组织以及一些白血病细胞系。PD-L1与PD-1结合形成受体配体复合物后发出抑制性信号，包括诱导IL-10（炎症与免疫抑制因子）产生，下调抗凋亡基因bcl-2来促进抗原特异性T细胞的凋亡，抑制淋巴结中CD8+ T细胞的增殖等。PD-L1与一些特殊情形下免疫系统的抑制有关，如怀孕、组织移植、自身免疫疾病、肝炎等。PD-L1除了能与PD-1以较强的亲和力结合（K_D值770nM）外，还能与CD80以较弱的亲和力结合（K_D值1.4µM）。

PD-L1被发现表达于多种肿瘤细胞表面，使得肿瘤细胞逃避免疫系统的杀伤，因此可被用作抗肿瘤免疫治疗的标靶。

（2）CD47/SIRPα

CD47（白细胞分化抗原47）也叫整合素相关蛋白（Integrin Associated Protein，IAP），是一种跨膜蛋白，与膜整合素相伴，也与血小板反应素-1 (Thrombospondin-1，TSP-1)、信号调控蛋白α（Signal-Regulatory Protein α，SIRPα）结合。CD47广泛表达于人体细胞上，并在多种肿瘤细胞上过表达，参与细胞凋亡、增殖、粘附、迁移等多种细胞活动。

SIRPα是一种跨膜受体糖蛋白，在免疫细胞中特异性表达于巨噬细胞、树突状细胞等髓系细胞表面，对免疫有负调控作用，与CD47结合后能够抑制吞噬作用和T细胞活化。

CD47与SIRPα结合后向免疫系统发出“Don’t eat me”（别吃我）信号，该机制能够保护人体正常细胞免遭免疫系统误杀，但是也能被肿瘤细胞所利用达到免疫逃逸。