[发明专利]心肌细胞特异启动子及其应用

说明书

本发明公开了心肌细胞特异启动子及其应用。本发明公开的心肌细胞特异启动子，是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)3′端至少含有序列表中序列1的第927‑1501位核苷酸序列，并且从序列1的第927位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为575至1501bp的任意一个DNA片段；所述DNA分子具有启动子功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。实验证明，本发明的启动子具有心肌组织特异性和心脏特异性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中心肌细胞特异启动子及其应用。

背景技术

进入21世纪以来，心血管疾病已经成为了威胁人类健康的重要疾病。在全球范围内，心血管疾病的发病率呈现逐年升高的趋势，在我国，心血管病患者大约有2.3亿人，每年死于心血管病的约300万人，可以说，心血管疾病已经成为威胁人类健康的第一杀手。心力衰竭是心血管疾病导致死亡的主要原因之一，约有40％的心血管疾病发展成为心力衰竭，因此，探明心衰发病的原因，机理，以及找到恰当的治疗心衰靶位点的意义十分重大。

心力衰竭的发病机制非常复杂，已经有很多的研究者从不同的角度出发来阐明心力衰竭的发展过程。研究证明，有大量的细胞内分子信号通路参与了这一过程，例如：压力负荷是引起心力衰竭的一个重要因素，病理性的压力通过G蛋白耦联受体，钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CAMKII)，丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)，蛋白质磷酸酶钙调磷酸酶，和转录因子心肌细胞增强因子2(MEF2)，活性T细胞核因子(NFAT)这一信号通路，最终引起心衰相关基因的表达的变化，从而引起心肌细胞的肥大，衰竭。这些复杂的信号通路有相当一部分是相互重叠与相互影响的，在不同信号通路相互重叠的节点，例如GSK3β，HDACs极可能成为心衰治疗的重要靶点。

在对心脏疾病进行基因治疗时，如何对完成对心脏靶向作用成为其中的重要一环，目前急需一种具有心脏或心肌细胞特异性的启动子。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供具有心肌细胞特异性启动子功能DNA分子。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了来源于大鼠(Rattus norvegicus)的DNA分子，该DNA分子的名称为CMRP，CMRP具有心肌细胞特异性启动子功能，CMRP是下述a)或b)或c)的DNA片段：

a)3′端至少含有序列表中序列1的第927-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第927位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为575至1501bp的任意一个DNA片段；所述DNA片段具有启动子功能；

b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；

c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。

其中，序列1由1501个核苷酸组成。

上述DNA分子中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次5min 0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次15min。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％、95％以上的同一性。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的启动子核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的启动子核苷酸序列70％或者更高同一性的核苷酸，只要保持了表达靶基因的启动子活性，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。