[发明专利]一种促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法

说明书

本发明涉及一种促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法，收集高山被孢霉发酵清液，通过亲水性有机溶剂萃取浓缩，筛选获得可调控高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的促进剂，在发酵初期0～48h，将上述促进剂按照0.1‑0.5％比例添加至正常的培养基，制备成条件培养液，接种，28℃培养，发酵结束后，在一些实施例的发酵结果中，生物量43.2g/L、油脂含量61.3％、ARA含量60.7％，ARA产量16.1g/L，发酵周期由192h缩短至168h。该方法简单，有效，促进了高山被孢霉生长，提高了花生四烯酸油脂产率，对于工业化应用具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，更具体的说，涉及一种促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法。

背景技术

花生四烯酸(ARA)是一种长链多不饱和脂肪酸，具有十分重要的生理功能，是人体自身不能大量合成但又不可缺少的重要营养物质，ARA大量存在于人体视网膜及大脑皮层的神经组织中，是胎儿和婴儿大脑发育的基础，对其智力和认知能力具有促进作用。

通过优化发酵条件提高ARA产量是目前研究的重点，中国专利201310475443.1公开了一种通过诱变及培养基优化提高ARA产量的方法，ARA产量虽有较大提升，但诱变具有随机性，且诱变后的菌株具有遗传不稳定性，易导致回复突变，不易进行工业化应用。中国专利CN201410556081.3公开了一种基于溶氧调控高山被孢霉发酵生产花生四烯酸油脂的方法，该方法主要通过调控高的溶氧浓度，提高ARA产量，但ARA产量提高的同时也增加了能耗，增加了生产成本。

目前，虽然利用微生物高山被孢霉发酵生产ARA油脂已经实现工业化生产，但其工业化生产过程中仍然存在生产周期长、生产效率低等问题。

发明内容

本发明为了解决上述问题，提供了一种促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法，不增加生产成本的前提下，可显著促进高山被孢霉生长及ARA油脂产率的方法，操作简单，可用于指导工业化生产。

本发明为了解决上述问题，提供的技术方案为：提供了一种促进高山被孢霉生长及ARA油脂产率的方法，包括如下步骤：

S100.进行第一批次的高山被孢霉发酵培养，收集发酵72h之后的发酵清液；

S200.利用亲水性有机溶剂萃取浓缩所述发酵清液，获得促进剂；

S300.在第二批次的高山被孢霉发酵培养过程中，添加所述促进剂至发酵培养基。

在本发明的促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法中，步骤S200中，所述亲水性有机溶剂为正丁醇、二氯甲烷、丙醇中的一种，亲水性有机溶剂与发酵清液体积比为1:1～1:5，萃取时间1～3h，萃取2～3次，合并萃取液，将萃取液旋转蒸发，萃取液浓缩比为1/100～1/200，得所述促进剂。

在本发明的促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法中，所述促进剂用无菌有机滤膜过滤除菌后，4℃密封保存。

在本发明的促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法中，步骤S300中，添加所述促进剂的时间为所述第二批次的高山被孢霉发酵培养进行0～48h时，按照体积比0.1～0.5％添加。

在本发明的促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法中，所述第一批次的高山被孢霉发酵培养和所述第二批次的高山被孢霉发酵培养，均使用高山被孢霉种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养。

在本发明的促进高山被孢霉生长及花生四烯酸油脂产率的方法中，高山被孢霉种子液的制备过程包括：将4℃冰箱保藏的斜面菌种高山被孢霉活化制备孢子液，将孢子液按照10％的接种量接入种子培养基28℃进行培养48h，制备种子液。将种子液按照5％～10％的接种量接入无菌发酵培养基，28℃下进行不同批次的高山被孢霉发酵培养。