[发明专利]一种扁桃花药细胞内多糖颗粒的染色方法

权利要求书

1.一种扁桃花药细胞内多糖颗粒的染色方法，其特征是先将扁桃花药固定在FAA固定液中保存，然后用石蜡切片法将扁桃花药切成12μm的切片，再在避光条件下用提前配制好的染液对扁桃花药切片染色、分色处理后，捞出切片晾干，将切片放在显微镜下观察多糖颗粒，或经中性树胶固定后制作成永久切片，再进行拍照观察；

所述的“用石蜡切片法将扁桃花药切成12μm的切片”，其特点是：取出FAA固定液中的扁桃花药，将扁桃花药经50％乙醇浸泡1h，70％乙醇浸泡1h，85％乙醇浸泡1h，95％乙醇浸泡1h，100％乙醇浸泡0.5h，另一瓶100％乙醇浸泡0.5h，1/2乙醇+1/2二甲苯混合溶液中浸泡0.5h，1/3乙醇+2/3二甲苯混合溶液中浸泡0.5h，二甲苯浸泡1h，新的二甲苯浸泡0.5h，5mL二甲苯+4g固体石蜡在40℃烘箱中浸泡6h，3mL二甲苯+5g固体石蜡在50℃烘箱中浸泡6h，纯石蜡溶液在60-62℃烘箱中浸泡6h，更换新的石蜡溶液2次，每次浸泡6h，将扁桃花药连同蜡液倒入纸盒中，用解剖针调整扁桃花药的位置，待纸盒内的蜡液凝固后，将纸盒放在冷水中浸泡12h，取出纸盒晾干，剥掉纸盒，用解剖刀将包有扁桃花药的石蜡切成小块，固定在小木桩上，再用半自动切片机将花药切成12μm的切片，36-40℃展片机上展片2h，36-38℃烘片机上烘片12h，将切片经二甲苯液体浸泡5min，新的二甲苯液体浸泡5min，l/2二甲苯+1/2乙醇浸泡5min，l/3二甲苯+2/3乙醇浸泡5min，无水乙醇中浸泡3min，95％乙醇中浸泡3min，85％乙醇中浸泡3min，70％乙醇中浸泡3min，50％乙醇中浸泡3min，30％乙醇中浸泡3min，清水浸泡3min，即得到扁桃花药切片；

所述的“提前配制好的染液”，其特点是：0.8％过碘酸溶液的配制方法是将0.8g过碘酸加入到100ml蒸馏水中；1N盐酸的配制方法是8.5mL含量22％的浓盐酸加入到91.5mL蒸馏水中；无色品红溶液的配制方法是将0.8g碱性品红加到100mL煮沸的蒸馏水中，充分溶解10min，冷却到50℃时过滤，在滤液中加入1N盐酸10mL，冷却到25℃后加入偏重亚硫酸钠0.5g，摇动三角瓶充分混匀，最后保存在棕色瓶中避光保存；

所述的“染色、分色处理”，其特点是：将0.8％过碘酸溶液滴加在扁桃花药切片组织上，浸泡10min，然后将切片放在装有蒸馏水的盆子中浸泡3min，再将切片放在新的蒸馏水中浸泡3min，捞出切片晾干后，再在扁桃花药切片组织上滴加无色品红溶液，避光条件下染色30min，然后用滤纸吸掉多余的染液，用0.5％偏重亚硫酸钠溶液浸洗2次，每次2-3min，在蒸馏水中浸泡3min，捞出切片晾干；

所述的“制作永久切片”，其特点是：将上述蒸馏水浸泡3min后的切片经90％酒精浸泡3min，无水乙醇浸泡3min，1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合溶液浸泡3min，l/3无水乙醇+2/3二甲苯混合溶液浸泡3min，二甲苯浸泡5min后取出，擦净载玻片底部残余的二甲苯液体，放在洁净干燥的A4纸上，待载玻片上部的二甲苯液体即将挥发完时，在扁桃花药组织上滴加1-2滴中性树胶进行封片，然后把封好的切片在38-42℃烘箱中烘烤12h，即制得永久切片。

2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于：所述的“将扁桃花药固定在FAA固定液中保存”，其特点是：将不同时期的花药固定在FAA固定液中，第7天之后更换一次固定液，第14天之后再更换一次固定液，然后将固定液和样品一起保存在4℃冰箱中。