[发明专利]一种芽孢杆菌HZ16中细胞毒活性物的制备方法

说明书

本发明公开了一株能够产细胞毒活性物的芽孢杆菌以及利用该芽孢杆菌制备细胞毒活性物的方法。本发明充分的利用绿色生物质资源，使用易获得的原料，简单的菌株发酵培养条件，以及易于控制的化合物制取工艺，获得产量较高的活性物。由该芽孢杆菌HZ16发酵提取物中分离出的细胞毒活性物的研究可以促进药物，特别是具有抗肿瘤活性药物的开发，细胞毒活性的快速检测为高通量筛选新药提供了方案，可用于医药领域新型抗菌、抗肿瘤等药物的研发。

技术领域

本发明涉及微生物活性物开发利用领域，具体涉及一株芽孢杆菌菌株的活性，以及发酵制备生物活性组分的工艺方法，及其产物在新药开发方面的应用。

背景技术

微生物代谢产物的多样性使其成为新药发现的重要来源。临床上应用的药物约有30％来源于微生物，如广泛应用于临床的紫杉醇、放线菌素D、丝裂霉素C、喷司他汀等。目前世界药物市场上的抗生素产品主要来源于微生物。芽孢杆菌属是芽孢杆菌目芽孢杆菌科最大的一属，也是产生医用抗生素的三个主要来源之一。外界环境对微生物次生代谢产物的产生有很大的影响，不同的发酵培养条件可以产生不同结构，不同生物活性的化合物。为了得到更有价值的的活性物，必须对菌株和发酵条件进行摸索和研究。

因此，如何提供一种新的芽孢杆菌以及如何利用该芽孢杆菌生产细胞毒活性化合物是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明首次证明了该株芽孢杆菌代谢产物的细胞毒活性，并对其产生较强活性的发酵条件进行研究。利用生物质资源的可再生、易获得、成本低、无污染等特点，开展生物制药的研发。为实现上述目的，本发明的活性物制备方法包括以下步骤：

本发明一方面涉及一株能够产细胞毒活性物的芽孢杆菌，所述的芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.12406。

本发明另一方面还涉及使用上述芽孢杆菌制备细胞毒活性物的应用，优选的，所述的细胞毒活性物对卤虫具有致死作用。

本发明另一方面涉及从芽孢杆菌HZ16制备细胞毒活性物的方法，所述的方法包括如下步骤：

将纯化得到的芽孢杆菌HZ16接种到培养基上，发酵后获得固体培养菌落，接种到摇瓶培养基发酵获得发酵液，将发酵获得的产物冷冻干燥除掉水分，用有机溶剂提取获得粗提物。

在本发明的一个优选实施方式中，所述培养基pH值为4-8或者为4、5、6、7、8。

在本发明的一个优选实施方式中，所述培养基为LB、复合培养基、PDA、查氏、M₂、M₂50％SW、高氏，优选为LB培养基。

在本发明的一个优选实施方式中，所述培养基配方为：

复合培养基(g/L)：氯化钙0.5，磷酸二氢钾(KH₂PO₄)0.1，氯化钾(KCl)0.05，硫酸镁(MgSO₄)0.1，葡萄糖20.0，蛋白胨15。

PDA培养基(g/L)：土豆200，葡萄糖200，1.1％琼脂。

查氏培养基(g/L):蔗糖30，NaNO₃ 3，K₂HPO₄ 1，FeSO₄ 0.01，KCl 0.5，MgSO₄·7H₂O0.5。

M₂培养基：麦芽提取物10，葡萄糖4，酵母提取物4。