[发明专利]可利用化学修饰核苷酸的RNA聚合酶突变体

权利要求书

1.一种T7 RNA聚合酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述T7 RNA聚合酶突变体具有DNA依赖的RNA聚合酶活性，且与野生型T7 RNA聚合酶相比，所述T7 RNA聚合酶突变体可以2’-氧-甲基修饰三磷酸核苷作为合成底物。

2.一种基因，所述基因编码权利要求1所述的T7 RNA聚合酶突变体，其DNA序列如SEQID NO：2所示。

3. 一种细胞，所述细胞能够表达编码权利要求2所述的T7 RNA聚合酶突变体的基因从而生产T7 RNA聚合酶。

4. 一种制备权利要求1所述的T7 RNA聚合酶突变体的方法，其包括如下步骤：

(1)从氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的野生型T7 RNA聚合酶氨基酸序列的N-端开始编号，选择第632位的Arg；

(2)用Cys氨基酸置换所选择的氨基酸，形成T7 RNA聚合酶突变体；

(3)在表达体系中表达核酸分子，其为编码步骤(2)的T7 RNA聚合酶突变体的核苷酸序列，并从所述表达体系分离表达所述T7 RNA聚合酶突变体。

5.一种制备含有一种修饰核苷酸的核酸的方法，具体步骤包括：

(1)制备转录反应混合物，包括权利要求1所述的T7 RNA聚合酶突变体、2’-氧-甲基修饰三磷酸核苷酸、镁离子、和核苷酸转录模板；

(2)在一定条件下转录上述核苷酸模板，由此所述T7 RNA聚合酶突变体高效利用所述2’-氧-甲基修饰三磷酸核苷酸底物合成2’-氧-甲基修饰RNA分子。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述转录反应混合物中还包括亚精氨。

7. 一种用于合成含有一种修饰核苷酸的核酸分子的试剂盒，其在单独的容器中包括权利要求1所述的T7 RNA聚合酶突变体或根据权利要求4的方法得到的T7 RNA聚合酶突变体、以及含有2’-氧-甲基修饰三磷酸核苷酸的缓冲液。