[发明专利]具有抑制病原体的免疫抑制功能的单克隆抗体，其抗原结合片段，以及产生该抗体的杂交瘤

说明书

本发明提供一种具有抑制病原体的免疫抑制功能的单克隆抗体、其抗原结合片段、以及产生该抗体的杂交瘤。单克隆抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:1所表示的或其相似的氨基酸序列所构成的肽结合。本发明还公开了所述单克隆抗体及其抗原结合片段的用途，以及所述杂交瘤的制法。

技术领域

本发明涉及一种具有抑制病原体的免疫抑制功能的单克隆抗体，其抗原结合片段，以及产生该抗体的杂交瘤，特别涉及一种关闭病原体所分泌的免疫抑制物质的作用，以提高宿主免疫能力的单克隆抗体，其抗原结合片段，以及产生该抗体的杂交瘤。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter Pylori,H.pylori)是一种革兰氏阴性细菌，全世界已经有一半的成年人口受到感染。由幽门螺旋杆菌引发的慢性炎症可以导致包括从消化道溃疡到胃癌的数种结果，取决所导致的胃发炎程度与范围而定。虽然宿主体内主要产生趋向Th1型的粘膜免疫反应，但因无法达到足以保护宿主免于幽门螺旋杆菌感染的程度，以致形成慢性感染，并会在部分患者身上发展成胃癌病变。先前的研究已经证明，幽门螺旋杆菌裂解物能抑制诱导有丝分裂原的T细胞增殖。显示该裂解物中存在与免疫抑制活性相关的因子。这些因子可以衰减T细胞的活性，且其作用机制与细菌毒力基因CagA及VacA无关。研究人员已经提出几种机制，用来解释幽门螺旋杆菌能够直接或间接抑制T-细胞的免疫反应的原因。包括：幽门螺旋杆菌可通过精氨酸酶抑制T细胞的增殖以及T细胞上受体的表达；幽门螺旋杆菌能刺激免疫抑制型激素TGF-β的释放；幽门螺旋杆菌会通过VacA干扰恒定链依赖抗原(invariant chain-dependent antigen)的表达；幽门螺旋杆菌会负向调控DC通过CagA磷酸化胞内蛋白的功能；或幽门螺旋杆菌能经由 VirB7和VirB11抑制巨噬细胞的吞噬功能，等等。

虽然上述各种机制都可能言之成理，但目前业界认为调节性T细胞(Treg细胞，regulatory T-cells)是抑制T细胞活性以及平衡炎症和细菌的持续感染的主要调控因素。2003年即有报导指出，CD4⁺CD25⁺T细胞与幽门螺旋杆菌诱导的免疫抑制和其寄生有关。进一步的研究表明，宿主Treg细胞是保护受幽门螺旋杆菌感染的宿主免于产生过度的胃炎症和疾病症候的主要关键，但是同时也会促进细菌寄生在胃和十二指肠黏膜上。此外，患者胃上皮细胞表达的共同刺激因子B7-H1，也会促进CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞在幽门螺旋杆菌感染后的胃上皮细胞的发展。这表示，这种病原体会促进宿主Treg细胞的诱导。随后的研究则检验这些幽门螺杆菌所诱导的Treg细胞的功能。结果显示这种Treg 细胞能够抑制幽门螺杆菌特异性效应T细胞的作用，使其失能。此外，幽门螺旋杆菌引起的胃炎常会并发FoxP3⁺Treg细胞的浸润，其菌体寄生的程度与黏膜中TGF-β的表达程度相关。以上各种研究报告显示，因幽门螺旋杆菌诱导的宿主Treg反应，对于宿主的幽门螺旋杆菌免疫反应，以及对于幽门螺旋杆菌的相关疾病的致病机制，都是重要的调控因素。

幽门螺旋杆菌热休克蛋白60(H.pylori heat shock protein 60– HpHSP60)可诱导单核细胞分泌促发炎细胞激素与TGF-β1的表达。已有报导提出HpHSP60与尿素酶一起表达在细菌的细胞壁，并可作为胃幽门螺旋杆菌对胃上皮细胞的粘附分子。此外，也有研究发现，施用抗HpHSP60抗体可以干扰幽门螺旋杆菌的生长。因此，HpHSP60不仅是影响幽门螺旋杆菌生存能力的重要因素，同时也提供幽门螺旋杆菌在人胃寄生所需的凭借。然而，许多研究也显示，HpHSP60为一种免疫原，会强烈的刺激促炎症细胞激素，如TNF-α、IL-8和IL-6的产生。这些细胞激素造成感染部位发生发炎反应，且这种HpHSP60诱导的发炎反应可促进肿瘤发生恶变，包括血管增生和癌细胞移转。HpHSP60 对于胃幽门螺旋杆菌感染人类宿主也是一种重要的致病因子。

由于HpHSP60和Treg细胞之间的关系复杂，对于两者关系的研究成为此行业重要的课题。不过，过去的研究都着重于HpHSP60所诱导的发炎反应。鲜少对于HpHSP60与宿主免疫抑制间的关系加以探讨。