[发明专利]血清48-lncRNA作为肝脏慢性疾病诊断标记物的应用

说明书

本发明公开了血清48‑lncRNA标记物作为肝脏慢性疾病诊断靶标的应用。发明人抽提了训练组109例血清样本的RNA，进行lncRNA表达谱芯片杂交，通过芯片扫描，数据提取，数据标准化处理后，经过SAM分析，挑选出181个在正常人和病人（包括慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者）之间表达变化倍数大于1.5及p0.001的lncRNA。接着，发明人采用Fisher判别分析对这181个差异表达的lncRNA进行筛选，签定出一组48个lncRNA组成的分子标签，结果显示这个标签可以100%的判别正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌。

技术领域

本发明涉及一种肝脏慢性疾病的诊断靶标，特别是涉及血清lncRNA标志物作为原发性肝细胞癌、肝硬化、慢性乙型肝炎诊断靶标的应用。

背景技术

据统计2012年全球有782，500例新发肝癌病例并且有745，500肝癌患者死亡，这些新发和死亡的肝癌患者大约50％发生在中国。研究表明乙肝病毒感染是慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要致病因素。全世界超过2.4亿慢性乙型肝炎患者，其中部分将发展成肝癌。在中国，乙肝病毒携带者占总人口数的10％，每年不伴有肝硬化的慢性乙肝患者的肝癌发病率在0.01-1.4％，而伴有肝硬化的慢性乙肝患者的肝癌发病率高达0.9-5.4％，这表明肝硬化是导致肝癌的危险因素。更值得关注的是，肝癌病人发病隐匿毫无症状，当有症状时大多数都已进入晚期，从而失去了手术治愈的机会。由此可见，早期诊断、早期发现和早期治疗是减少肝癌病人死亡、提高生存的最主要的途径。目前，为了早期发现和早期诊断肝癌，推荐的方法是：肝硬化患者最好每半年做一次肝脏B超检查以及验血查甲胎蛋白(AFP)。然而，B超检查有一定的局限性，往往难以确定肿块的性质，而且B超检查结果容易受到检查者经验和分辨率的限制，这些因素都将影响诊断结果的准确性；AFP对肝癌的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后判断等均具有重要价值，但其诊断肝癌的阳性率仅60-70％，其敏感度和特异性均受到限制。所以，找出在肝癌发生发展中起关键作用的生物标记物，根据其在肝癌中的作用和变化开发出新的血清学分子诊断试剂以应用于临床，将提高肝癌早期诊断的灵敏度和特异性，进而将极大地提高肝癌病人的生存时间和生存质量。

最近的研究表明，长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)可以作为人类疾病包括癌症的生物标志物。长链非编码RNA是指长度超过200bp的非编码RNA，一般不编码蛋白质，起初人们认为lncRNA是一种无意义的转录副产物，在人体的生命过程中没有特殊的意义，但是随着深入的研究，人们发现lncRNA在人体的很多功能中都发挥了重要的作用，比如转录激活、转录干扰、X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、核内运输等细胞和分子过程中lncRNA都发挥着重要功能。研究显示，lncRNA在人体体液中稳定存在，因此，它们是癌症诊断和预后判断的理想的候选生物标志物。Xie等发现lncRNA-HULC在肝癌患者血浆中高表达，HULC可以作为肝癌诊断的标志物。2015年，Lu等研究表明血清lncRNA-uc003wbd和lncRNA-AF085935在肝癌患者与乙肝患者血清中的表达，和正常对照组相比，均显著增加，提示两者可能是肝癌和慢性乙型肝炎诊断的潜在生物标志物。同年，Tang等利用lncRNA表达谱芯片检测了3例HCC患者和3例正常对照的血浆样本，鉴定出一个3-lncRNA(RP11–160H22.5，XLOC_014172和LOC149086)组成的分子标签，它可以作为肝癌诊断的潜在生物标记物。

然而，已经报道的单个或少数几个lncRNA构成的标签对肝脏慢性疾病诊断和鉴别诊断的准确性有限，达不到临床应用的要求。因此，目前临床上急需开发出一种检测结果更为准确的血清lncRNA分子标签。

发明内容

本发明的目的在于提供一组具有更高准确性的用于肝脏慢性疾病诊断的lncRNA分子标签，该分子标签由48-lncRNA组成，可以高准确性地区分正常、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌四个人群。

本发明所采取的技术方案是：