[发明专利]人降钙素原胶体金定量检测卡

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的涉及一种抗人降钙素原(PCT)抗体及其制备方法以及上述抗体在人降钙素原检测中的应用。

背景技术

降钙素原(Procalcitonin，PCT)是一种无激素活性的糖蛋白，由降钙蛋白、降钙素、N端残基片段组成，是降钙素(Calcitonin，CT)的前体，相对分子量13KDa，半衰期25-30小时。生理条件下，PCT主要由甲状腺滤泡旁C细胞产生；病理状态下，PCT可来源于肝、肺等多种器官和组织。

PCT在临床上具有广泛而又重要的应用价值。健康人血浆PCT含量极低，在正常人血中低于0.5ng/ml。当发生严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，它在血浆中的水平升高；而发生自身免疫、过敏和局部感染、病毒感染、慢性非特异性炎症、癌症发热、移植物宿主排斥反应等疾病时，PCT水平不会升高；这就决定了PCT的高度特异性，因此可用于各种临床情况的鉴别诊断。此外，PCT浓度和炎症严重程度成正相关，并随着炎症的控制和病情的缓解而降低至正常水平，因而PCT又可作为判断病情与预后的可靠指标。PCT可在感染后2个小时后检测到，对临床早期诊断具有重要意义，在感染后12～24小时达到高峰。

目前检测PCT常用的实验室方法有放射免疫学分析法(RIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、胶体金比色法(GICA)和酶联免疫法(ELISA)。放射免疫学分析法是利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接降钙素原。该方法能检测正常人的血清PCT，但检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质；且存在检测耗时长(19～22h)，有放射性元素的污染，标记物稳定性差，废弃物难以处理等缺点而使其应用受到限制。化学发光免疫分析法(CLIA)一般需要配套昂贵的全自动电化学发光检测仪，常规实验室无法开展，而且给患者带来不必要的费用，增加患者负担。而利用生物素-亲和素系统检测PCT的电化学发光免疫试剂盒，也需要配套昂贵的全自动电化学发光检测仪，常规实验室无法开展，而且给患者带来不必要的费用，增加患者负担。而本发明胶体金检测试纸条可满足快速检测及床边检测的需求且无需专业技术人员。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供能有效的、特异性结合人降钙素原的抗体。更具体地说：

本发明的第一目的在于提供一种抗人降钙素原抗体，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

优选的是本发明中的抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

本发明第二个目的是提供一种单链抗体，所述单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示。

本发明第三个目的是提供一种编码上述单链抗体的核苷酸序列，编码单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。

本发明第四个目的是提供一种含有上述核苷酸序列的表达载体。

本发明第五个目的是提供一种含有上述表达载体的重组宿主细胞。所属宿主细胞可以是大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞，优选为毕赤酵母。

本发明第六个目的是提供一种生产上述单链抗体的方法，包括：

1)在合适的条件下培养上述重组宿主菌表达抗体；

2)然后从宿主菌中纯化、收集抗体。

本发明的第七个目的在于提供上述抗人降钙素原抗体在检测人降钙素原含量中的应用。

本发明的第八个目的在于提供一种可配对检测人降钙素原的抗体对：外购抗降钙素原抗体MJG03(购于杭州启泰生物技术有限公司，编号为MJG03)和本发明的抗人降钙素原抗体；该抗体对组合的检测灵敏度高，特异性好。