[发明专利]基于分子印记纳米磁珠与质谱联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的检测方法

权利要求书

1.一种基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)制备印记磁珠：将Fe₃O₄@SiO₂纳米粒分散于致孔剂中，加入功能单体，交联剂，引发剂，模板分子人参皂苷Rb₁，搅拌，室温聚合20h，再用乙酸和甲醇混合溶液洗去模板分子，真空干燥；

(2)样品处理：大鼠给药三七总皂苷水溶液后，分别于4,8,12,16,20,24,36,72小时的时间点取粪便样品，将每份样品取出相同的量制成混合粪便，随后混合粪便样品处理如下：将混合粪便加入样品重3倍的预处理溶剂涡旋、离心后，取上清液，氮气吹干，预处理溶剂复溶，加入印记磁珠进行吸附解析；

(3)样品分析：

利用LTQ-Orbitrap-MS分析仪对解析液进行分析，鉴定三七总皂苷的代谢物质群；高效液相条件：流动相A：0.2％甲酸水溶液；流动相B：甲醇；梯度条件：0–2min5％B；2–10min 5％-50％B；11–15 50％-95％B and；18–18.1 95％-5％B；18.1–23min 5％A；流速：0.3ml/min；柱温：35℃；质谱条件：N₂流速：10.0l/min；N₂温度：320℃；辅助离子加热：60℃；毛细管电压：3500V；碰撞能：55V。

2.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤1所述的功能单体为三乙氧基硅烷，人参皂苷Rb1与三乙氧基硅烷的摩尔比为(1～4):(1～16)。

3.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤1所述的交联剂为正硅酸四乙酯，正硅酸四乙酯与三乙氧基硅烷的摩尔比为(1～5):(1～7)。

4.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤1所述的致孔剂为甲醇，Fe3O4@SiO2纳米粒与致孔剂的比例为(10～50mg):(10～30ml)。

5.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤1所述的引发剂为HAC，引发剂与功能单体的体积比为(1～4):(1～8)。

6.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤2所述的混合粪便每个时间点取样量为0.5g。

7.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤2所述的混合粪便使用甲醇作为预处理溶剂。

8.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤2所述的印记磁珠的用量为每100mg混合粪便加入印记磁珠10～30mg。

9.根据权利要求1中所述的基于分子印记纳米磁珠与LTQ-Orbitrap-MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于：步骤2所述的解析液为醋酸甲醇混合溶液，用量为每10～50mg印记磁珠使用1～5ml解析液。