[发明专利]一种血液糖化血红蛋白胶体金检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，尤其涉及一种血液糖化血红蛋白胶体金检测方法。

背景技术

糖化血红蛋白（HbA1c）是血液葡萄糖通过非酶作用，经细胞膜与红细胞内血红蛋白-链颉氨酸结合形成的产物，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比，是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。

血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右。血糖是从食物中的碳水化合物分解而来的血液中的单糖,通常仅指葡萄糖，血糖测试结果反映的是即刻的血糖水平。所以糖化血红蛋白较血糖测定更有临床意义，被誉为糖尿病病情监测的“金标准”，在临床检测中进行日常检测作为血糖控制的指标。

目前临床上测定糖化血红蛋白的主要检测方法有高效液相色谱﹑电泳法﹑亲和层析法等。

离子交换高效液相色谱分析法，它是在经典液相层析法基础上，引进了气相层析的理论具有气相层析的全部优点。测试前需要采用专用仪器对血样中的血红蛋白和糖化血红蛋白进行分离，测试时需使用大型色谱分析设备进行检测，故检测必须在医院由专人进行，难以满足糖化血红蛋白即时检测的需求。

电泳法，相比于非糖化血红蛋白，因糖化而变化的总电荷和糖化血红蛋白的等电点变化是琼脂糖凝胶或者pH梯度5.0～6.5的凝胶等电聚焦电泳分离的基础。琼脂糖凝胶电泳的血红蛋白亚组分分辨率很小，而等电聚焦可以更好地使亚组分分离。可能由于试验的自动化程度不足，重要性已经下降。

亲和层析法，将血样本中的血红蛋白加到层析柱后，所有的糖化血红蛋白（HbA1和旁链糖化的血红蛋白；总糖化血红蛋白）与硼酸结合而非糖化血红蛋白通过层析柱可被测量。在加入高浓度也包含顺式-羟基的多羟基复合物，例如山梨醇后，糖化血红蛋白与硼酸的结合被替换而从柱子上洗脱下来。亲和层析法对经翻译以后修饰的血红蛋白和病理血红蛋白的影响相对不敏感。利用亲和层析法，仅能测定总糖化血红蛋白。广泛使用的亲和层析方法，也仅是用经验算法从总糖化血红蛋白值计算出“标准的HbA1c”，因此存在定量无法精准的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种血液糖化血红蛋白胶体金检测方法，包括如下步骤：

（1）制备胶体金免疫检测试剂盒，其中包括标准比对品的制备, 所述标准比对品为不与血红蛋白、抗血红蛋白抗体、糖化血红蛋白以及抗糖化血红蛋白抗体发生免疫性结合反应的物质；

（2)将待检测血液样本放入胶体金免疫检测试剂盒，以标准比对品作为参比品，与糖化血红蛋白进行免疫检测反应，读取样本糖化血红蛋白的免疫检测结果a以及糖化血红蛋白对应的标准比对品免疫检测结果b；

（3）将与步骤（2）中同一种待检测血液样本放入胶体金免疫检测试剂盒，以与步骤（2）中同一种标准比对品作为参比品，与血红蛋白进行免疫检测反应，读取样本血红蛋白的免疫检测结果c以及血红蛋白对应的标准比对品免疫检测结果d；

（4）计算得出比值A=a/b，比值B=c/d；

（5）计算糖化血红蛋白的含量=A/B。

进一步地，所述检测方法所用原料包括标准比对品、抗血红蛋白抗体、抗糖化血红蛋白抗体、样品垫、金标抗体结合垫、载体、吸水垫和PVC板。

进一步地，所述标准比对品为兔IgG、驴IgG、马IgG、羊IgG、鼠IgG的一种或两种或两种以上。

进一步地，所述抗血红蛋白抗体为抗血红蛋白单克隆抗体和抗血红蛋白多克隆抗体的一种或两种。

进一步地，所述抗糖化血红蛋白抗体为抗糖化血红蛋白单克隆抗体、抗糖化血红蛋白多克隆抗体、抗血红蛋白单克隆抗体、抗血红蛋白多克隆抗体的一种或两种或两种以上。

进一步地，所述载体为硝酸纤维素膜。

具体实施方式

本发明实施例提供了一种糖化血红蛋白胶体金检测试剂盒，包括：

卡壳，血红蛋白试剂条和糖化血红蛋白试剂条；

卡壳包括上卡壳和下卡壳，上卡壳上有观察窗和加样孔，下卡壳的卡壳槽里固定有血红蛋白试剂条和糖化血红蛋白试剂条，上卡壳和下卡壳卡接固定；