[发明专利]基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr的装置及其制备方法

权利要求书

1.一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：由样品稀释液冻干粉、NGAL和Cr标准品冻干粉、免疫层析试纸条组成；

(1)样品稀释液冻干粉是将20mL、pH＝7.2～7.5，含150～250mmol/L NaCl、0.25～0.5％(vol/vol)Tween-20、0.5％～2％(wt/vol)BSA或2.5％～5％(wt/vol)脱脂奶粉的50～100mmol/L HEPES缓冲液经机械或磁力搅拌充分后，采用0.22μm或0.45μm滤器进行过滤除菌和除去不溶性杂质，经冻干后得到；

(2)NGAL和Cr标准品冻干粉共4套，其中，

标准品A：是用于单体uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng单体NGAL和6μmol Cr；

标准品B：用于同二聚体uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng同二聚体NGAL和6μmol Cr；

标准品C：用于异二聚uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng异二聚体NGAL和6μmolCr；

标准品D：用于三种分子形式uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng NGAL和6μmol Cr，其中单体NGAL、同二聚体NGAL及异二聚体NGAL各占40％、40％和20％；

(3)所述免疫层析试纸条分A和B两类，A类免疫层析试纸条由衬板、样品垫、分析膜及吸收垫组成；B类免疫层析试纸条由衬板、UCP结合垫、分析膜及吸收垫组成；UCP结合垫中含有UCP标记抗NGAL抗体和UCP标记Cr；

(4)分析膜上设有平行的两个检测线T1、T2和一个质控线C，两个检测线T1、T2分别包被抗NGAL抗体和抗Cr抗体，且两者可以相互对调；质控线包被抗UCP标记抗体来源动物免疫球蛋白的抗体；

所述衬板用于支撑样品垫或UCP结合垫、分析膜和吸收垫的组装，所述UCP结合垫用于结合UCP标记抗NGAL体和UCP标记Cr，所述分析膜用于检测线和质控线的设置从而实现NGAL和Cr的定量及免疫层析试纸条的质控，所述吸收垫用于收集分析后的样品溶液。

2.如权利要求1所述的一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：A、B两类免疫层析试纸条的样品垫或UCP结合垫、分析膜、吸收垫及衬板的宽度一致，均为4～5.5mm，样品垫和UCP结合垫的长度为5～10mm，分析膜的长度为25～40mm，吸收垫的长度为20～30mm，衬板的长度等于前后搭接组装后样品垫或UCP结合垫、分析膜及吸收垫的长度总和。

3.如权利要求1所述的一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：其中样品垫和UCP结合垫的材料为玻璃纤维素膜或具有类似性质的膜材料，分析膜的材料为硝酸纤维素膜或具有类似性质的膜材料，吸收垫的材料为吸水滤纸或具有类似功能的材料，衬板的材料为具有自粘贴性质聚氯乙烯胶板或具有类似功能的材料。

4.如权利要求1所述的一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：A类免疫层析试纸条的使用是将标准品工作液用样品稀释液进行2倍梯度稀释法进行稀释，获得标准品浓度梯度溶液；将尿液样品用样品稀释液稀释10～100倍；取25～100μL上述标准品浓度梯度溶液或尿液样品稀释液分别复孔加入相应的96孔板的孔中或类似结构的容器当中，然后在上述96孔板中再各加入25～100μL经稀释的UCP标记抗NGAL抗体溶液和UCP标记Cr溶液组成的混合溶液，混匀制成悬液；接着将A类免疫层析试纸条的样品垫端垂直浸入上述悬液中，等待5～30min后取出水平放置5～20min后进行UCP信号采集。

5.如权利要求1所述的一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：B类免疫层析试纸条的使用是将标准品工作液用样品稀释液进行2倍梯度稀释法进行稀释，获得标准品浓度梯度溶液；接着将尿液样品用样品稀释液稀释10～100倍；接着将B类免疫层析试纸条水平放置后，加20～100μL的标准品浓度梯度溶液或尿液样品稀释液至UCP结合垫上，等待10～30min后进行UCP信号采集。

6.如权利要求1所述的一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：UCP是平均粒径为200～600nmol/L的经二氧化硅包被和表面功能化修饰的由稀土金属元素所构成的晶体材料。