[发明专利]PCSK9特异性的结合蛋白MV072及其应用

说明书

本发明涉及PCSK9特异性的结合蛋白MV072及其应用。本发明提供了含有独特的互补决定区的MV072蛋白，即特异性结合前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型(PCSK9)的结合蛋白，其能与PCSK9特异性结合并有效抑制PCSK9的功能、降低血浆中LDL胆固醇水平，可以应用于治疗与PCSK9功能相关或者是受到PCSK9功能影响的疾病。

技术领域

本发明属于免疫学领域，更具体地，本发明涉及前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型(Proprotein convertase subtilisin kexin type 9，PCSK9)特异性的结合蛋白及其应用。

背景技术

心血管疾病是导致人类死亡的头号杀手。低密度脂蛋白胆固醇(Low-densitylipoprotein cholesterol，LDL-C)已被证实是导致心血管疾病的主要因素之一。LDL-C的这种作用是相对独立且可以有效控制的，在过去20年中，他汀(statins)类降脂药的使用成功地减少了心血管疾病的发病率。

但是他汀类药物治疗的方法却不总是有效的，还存在着一种另外的降血脂疗法的需求。一部分病人，尤其是家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolaemia FH)患者，往往对于他汀类的药物很不敏感。即使使用了最高剂量的他汀类药物，这些患者也很难达到一个较低的LDL-C水平。此外，他汀类药物还存在着一些诸如引起肌痛及横纹肌溶解等副作用，导致一些病人不能使用或者只能很小剂量使用他汀药物来控制血脂水平。前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin9型(PCSK9)抑制剂正是一种这样的全新药物类型，提供了一个全新的控制血液中LDL-C浓度的选择。

PCSK9是一种丝氨酸蛋白酶，参与调解低密度脂蛋白受体(Low-densitylipoprotein receptor，LDLR)的水平。体外实验证实，在HepG2细胞中加入PCSK9之后，细胞表面的LDLR水平降低。小鼠实验显示，PCSK9蛋白水平的提高能降低肝脏中LDLR的蛋白水平，同时，相对于正常小鼠，在PCSK9敲除小鼠中LDLR水平有所提高。业已显示PCSK9与LDLR直接结合，并与LDLR同时被吞噬，在整个内吞途径中PCSK9与LDLR共发生免疫荧光。目前没有PCSK9降解胞外LDLR的直接证据，其降低胞外LDLR蛋白水平的机制尚不明确。

研究已证实PCSK9在调控LDL产生中起作用。PCSK9的表达或上调与增加的LDL胆固醇的血浆水平有关，PCSK9表达的抑制或缺乏与LDL胆固醇血浆水平低有关。

因此，制备抑制或拮抗PCSK9活性和PCSK9在各种治疗状况下所发挥的相应作用的、基于治疗的PCSK9拮抗剂尤其是特异性结合PCSK9的单克隆抗体非常重要。目前在研的PCSK9抑制剂大概包括小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)、反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides，ASOs)、单克隆抗体以及一些应用新技术产生的特异性结合融合蛋白，如adnectin技术产生的融合蛋白。目前正在研究的PCSK9抑制剂主要是siRNA类药物RG7652(Alnylam Pharmaceuticals/The Medicines Company)，Adnectin技术融合蛋白BMS-962476(BMS)，ASO类药物ALN-PCS02(Idera Pharmaceuticals)，抗体类药物如Bococizumab(Pfizer/Rinat)、LGT-209(Novartis)等。

但是，动物试验或临床研究中发现，一些PCSK9单克隆抗体类抑制剂，还存在着特异性、亲和力不够理想或存在副作用的问题，因此，本领域需要进一步优化及制备新的抗PCSK9抗体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的PCSK9特异性的结合蛋白MV072及其应用。

在本发明的第一方面，提供特异性结合PCSK9的结合蛋白MV072，该结合蛋白具有轻链可变区和重链可变区，且，