[发明专利]骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒

权利要求书

1.一种骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括针对每种标志基因的mRNA的捕获探针和信号放大系统，所述标志基因包括有如下两类：选自EpCAM、CDH1、KRT8、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20中的至少两种的上皮细胞标志基因，选自MMP2、MMP9、VIM、CDH2、FN1、HIF-1a、SERPINE1、SURVIVIN、TWIST1、AKT2、SNAIL中的至少两种的骨肉瘤转移相关间质细胞标志基因；所述信号放大系统包括有末端修饰有荧光基团的扩增探针，或包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针，不同种类目标基因的荧光基团互不相同；其中，

所述捕获探针用于连接标志基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：可与待检测的标志基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和标志基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别的标志基因mRNA的捕获探针的P2序列相同；

每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列。

2.根据权利要求1所述的骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述标志基因的mRNA还包括有针对白细胞标志基因的mRNA的一类，所述白细胞标志基因为CD45。

3.根据权利要求1所述的骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述上皮细胞标志基因的捕获探针中：针对EpCAM基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的2条或2条以上，针对CDH1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.20中的2条或2条以上，针对KRT8基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30中的2条或2条以上，针对KRT16基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.40中的2条或2条以上，针对KRT17基的因特异性序列P1选自SEQ ID NO.41～SEQ ID NO.50中的2条或2条以上，针对KRT18的基因特异性序列P1选自SEQ ID NO.51～SEQ ID NO.60中的2条或2条以上，针对KRT19的基因特异性序列P1选自SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.70中的2条或2条以上，针对KRT20的基因特异性序列P1选自SEQ ID NO.71～SEQ ID NO.80中的2条或2条以上。

4.根据权利要求3所述的骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，针对上皮细胞标志基因的捕获探针的P2序列为SEQ ID NO.201；所述上皮细胞标志基因的扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.204，P4序列为SEQ ID NO.207。