[发明专利]CAH相关基因靶向二代测序检测方法

权利要求书

1.一种引物集，其特征在于，所述引物集包括用于特异性扩增CYP21A2的第一引物对，

其中，所述的CYP21A2的第一引物对包括：

第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示；和

第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的引物集，其特征在于，所述的引物集还包括选自下列(a)－(i)组中的一个或多个引物对：

(a)用于扩增CYP21A2外显子或内含子的引物对；

(b)用于扩增StAR外显子或内含子的引物对；

(c)用于扩增CYP11A1外显子或内含子的引物对；

(d)用于扩增HSD3B2外显子或内含子的引物对；

(e)用于扩增CYP11B1外显子或内含子的引物对；

(f)用于扩增CYP11B2外显子或内含子的引物对；

(g)用于扩增POR外显子或内含子的引物对；

(h)用于扩增CYP17A1外显子或内含子的引物对；

(i)用于扩增H6PD外显子或内含子的引物对。

3.如权利要求1所述的引物集，其特征在于，所述的引物集还包括以下pool引物子集：

pool引物子集p1，所述的引物子集p1用于进行针对CYP21A2基因的多重PCR(pool1引物)；

pool引物子集p2，所述的引物子集p2用于进行针对CYP21A2基因的多重PCR(pool2引物)；

pool引物子集p3，所述的引物子集p3用于进行针对StAR,CYP11A1,HSD3B2,CYP11B1,CYP11B2,POR,CYP17A1,H6PD基因的多重PCR(pool3引物)；和

pool引物子集p4，所述的引物子集p4用于进行针对StAR,CYP11A1,HSD3B2,CYP11B1,CYP11B2,POR,CYP17A1,H6PD基因的多重PCR(pool4引物)。

4.如权利要求3所述的引物集，其特征在于，pool引物子集p1、p2、p3和p4中包含的引物对所对应的扩增片段的长度为100-300bp，较佳地为150-250bp，更佳地为180-220bp。

5.如权利要求1所述的引物集，其特征在于，所述的第一上游引物和第一下游引物特异性扩增对应于CYP21A2基因的扩增产物，但不扩增对应于CYP21A1P基因的扩增产物。

6.一种PCR扩增体系，其特征在于，所述的扩增体系包括：用于扩增的缓冲体系以及位于所述体系中的权利要求1所述的引物集。

7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括一个或多个容器，和位于所述容器中的如权利要求1所述的引物集。

8.一种确定CAH相关基因的突变情况的检测方法，其中，CAH相关基因包括：CYP21A2基因、StAR基因、CYP11A1基因、HSD3B2基因、CYP21A2基因、CYP11B1基因、CYP11B2基因、POR基因、CYP17A1基因、和H6PD基因，其特征在于，

所述方法包括步骤：

(a)提供一待测的基因组DNA样品；

(b)利用特异性扩增CYP21A2的第一引物对，对待测的基因组DNA样品进行PCR扩增，从而获得含第一扩增产物的第一混合物；

其中，所述的CYP21A2的第一引物对包括：

第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示；和

第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示；

(c)以第一扩增产物为模板，对CYP21A2基因进行检测，从而确定CYP21A2基因的突变情况；以及以待测的基因组DNA为模板，对除CYP21A2基因之外的其它CAH相关基因进行检测，从而确定CAH相关基因的突变情况。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中，所述的检测包括进行多重PCR，并进行测序分析。

10.一种确定CYP21A2基因的突变情况的检测方法，其特征在于，包括步骤：

(a)提供一待测DNA样品；

(b)利用特异性扩增CYP21A2的第一引物对，对检测样品进行PCR扩增，从而获得第一混合物；

其中，所述的CYP21A2的第一引物对包括：

第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示；和

第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示；

(c)以第一混合物为模板进行多重PCR，从而获得第二混合物；和

(d)对获得的第二混合物进行检测，从而获得CYP21A2基因的突变情况。