[发明专利]一种苜蓿多糖的提取和纯化方法

权利要求书

1.一种提取和纯化苜蓿多糖的方法，包括如下步骤：

1)将苜蓿碎段用水浸提两次，合并两次所得的滤液，浓缩后醇析，收集析出物后离心或过筛，收集沉淀，再加水溶解所述沉淀，得到粗苜蓿多糖溶液；

2)将步骤1)所得粗苜蓿多糖溶液依次进行透析和脱蛋白处理，将脱蛋白所得体系沉淀后离心或过筛，收集上清液，醇析后，收集沉淀，干燥，得到所述苜蓿多糖；

所述步骤2)透析步骤中，透析液为去离子水；

所述透析包括如下步骤：将透析袋一端用透析夹夹住，加入70％透析袋体积的所述步骤1)所得粗苜蓿多糖溶液，然后用夹子夹住另一端，用去离子水透析，在第3h、第9h和第18h更换去离子水透析，第30h时收集透析袋中溶液；

透析的温度为4℃；

透析袋的截留分子量为8000-14000D；

所述脱蛋白步骤中，脱蛋白剂为质量百分浓度为≥95％的三氯甲烷的水溶液；

所述脱蛋白的时间为上清液由深褐色变为浅黄色或大量出现土黄色絮状沉淀；

所述沉淀步骤中，温度为5-10℃；时间为12h。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述苜蓿碎段的长度为2-3cm；

所述用水浸提步骤中，苜蓿碎段与水的用量比为1g：10-20g；

所述用水浸提包括如下步骤：将所述苜蓿碎段与水混合后煮沸，过滤，收集所得滤液，记为滤液I；再向所得滤渣中加水，煮沸，收集所得滤液，记为滤液II；最后合并所述滤液I和滤液II；

所述煮沸步骤中，时间均为0.5h-1h；

所述加水步骤中，水的用量为由滤液I和滤渣组成的体系的体积的1倍。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述步骤1)浓缩步骤中，浓缩的程度为将所述滤液浓缩至原体积的1/4至1/10；

所述醇析步骤中，所用醇析剂为乙醇，

所述醇析剂的用量为浓缩后所得体系体积的4倍；

醇析的时间为12h；

所述离心步骤中，转速为4000rpm；时间为10min；

所述过筛步骤中，筛孔的目数为200目。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述乙醇为无水乙醇或乙醇的质量百分含量为95％的工业乙醇。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在所述步骤1)之后，所述步骤2)透析之前，先对透析所用透析袋进行如下预处理：

将碳酸氢钠的水溶液和浓度为1mmol/L的乙二胺四乙酸的水溶液加去离子水至300mL，调节体系的pH为8，将透析袋置于其中，煮沸15min，再用去离子水冲洗3遍后，将处理后的透析袋置于浓度为1mmol/L的乙二胺四乙酸的水溶液中煮沸15min后用纯净水冲洗3遍；

所述加去离子水步骤中所述碳酸氢钠的水溶液中，碳酸氢钠与水的用量比为0.02g：1mL；所述碳酸氢钠的用量为6g；所述乙二胺四乙酸的用量为0.0877g。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)过筛步骤中，筛孔的目数为200目；

所述醇析步骤中，所用醇析剂为乙醇，

醇析的时间12h；

所述干燥步骤中，干燥的方式为冷冻干燥、喷雾干燥或减压干燥。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述苜蓿为现蕾期苜蓿。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述苜蓿为现蕾期紫花苜蓿。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：在所述步骤1)浸提步骤之前，将所述苜蓿粉末烘干；

所述烘干步骤中，温度为100-105℃。