[发明专利]一种通过固体发酵镰孢菌Fusariumsp.产生新抗菌剂sambacide的方法

权利要求书

1.一种通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新抗菌剂sambacide的方法，其特征在于按如下步骤进行固体发酵：

（1）将拟用微生物镰孢菌Fusarium sp. B10.1首先进行活化，即将Fusarium sp. B10.1接种到经过121 °C高温灭菌处理的PDA斜面培养基后，于恒温培养箱中培养3-7 d后，置于4 °C冰箱中；

（2）将活化的菌种接到PDB种子培养基中，于恒温摇床中培养3-7 d；

（3）取洗净的土豆切成丁后，取适量的土豆丁置于组织培养瓶中；将装有土豆的组织培养瓶加盖包装后置于121 °C高温灭菌箱中灭菌30 min， 取出后将组织培养瓶冷却；

（4）将步骤（2）的种子培养基在无菌环境下接种到经过步骤（3）前处理的土豆上，加盖后置于培养箱中培养5-40 d后取出；

（5）经微生物镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵后的土豆培养基经过甲醇超声提取、过滤和浓缩得到粗提物；分离粗提物得到的sambacide的结构式如下：

；

（6）经TLC薄层层析法检测，然后经过硅胶柱进行分离，分离过程采用梯度洗脱，洗脱剂为氯仿和甲醇混合物，其中氯仿：甲醇按20:1—5:1混合，然后经分离得到的化合物上凝胶柱纯化，通过1D/2D NMR以及HRESIMS鉴定得到新化合物结构；

（7）采用如下HPLC色谱条件测定sambacide的产量。

2.根据权利要求1所述通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新的抗菌剂sambacide的方法，其特征在于所述发酵方法为固态发酵。

3.根据权利要求1所述通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新的抗菌剂sambacide的方法，其特征在于所述发酵时间为5-40 d。

4.根据权利要求1所述通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新的抗菌剂sambacide的方法，其特征在于所述发酵温度为20-30 °C。

5.根据权利要求1所述通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新的抗菌剂sambacide的方法，其特征在于所述提取溶剂为甲醇。

6.根据权利要求1所述通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新的抗菌剂sambacide的方法，其特征在于按如下HPLC条件进行含量测定：

（1）色谱柱：ODS高效液相色谱柱；

（2）梯度洗脱程序： 0–10 min, 30–60% 乙腈; 10–20 min, 60% 乙腈; 20–25 min, 60–30% 乙腈；

（3）检测波长：247 nm；

（4）流速：1.5 mL/min；

（5）柱温：25 ℃。