[发明专利]一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法

权利要求书

1.一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：

(1)发酵液预处理：按刺糖多孢菌发酵液体积0.05～0.15w/v％的量加入复合酶，搅拌后加入草酸调整pH值为4.0～5.0，使发酵液中形成大量的絮状悬浮物，过滤后收集滤清液；

(2)过活性炭柱去除大量色素和胶粘性杂质：将步骤(1)中的滤清液上活性炭柱，收集过柱液，得到富集多杀菌素的水相；

(3)多杀菌素萃取：使用乙酸乙酯作为萃取剂，加入量为水相体积的1/4～1/2，萃取富集多杀菌素水相中的多杀菌素，得到负载有机相；

(4)反萃取：以酒石酸溶液为反萃取剂，加入量为负载有机相体积的0.5～1.5倍进行反萃取，收集反萃取相；

(5)精滤：利用精细过滤器对反萃取相进行精滤，得到高纯精滤液；

(6)析晶：用NaOH溶液调节高纯精滤液的pH值至9～11.5，使多杀菌素以晶体形式析出，得到结晶液；

(7)分离：使用离心机对结晶液进行离心分离，控制离心机的转速为1000～1400rpm，得到多杀菌素湿晶；

(8)干燥：对得到的多杀菌素湿晶进行真空干燥，即得到多杀菌素。

2.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的复合酶由以下重量百分比含量的原料混合得到：溶菌酶0.3～2、纤维素酶3～5、微生物絮凝剂93～96。

3.根据权利要求2所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，

所述的纤维素酶为复合酶，由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶混合组成，

所述的微生物絮凝剂主要成分为蛋白质，其中含有疏水性氨基酸，包括丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸及天冬氨酸。

4.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(1)中控制搅拌转速为20～50rpm，搅拌30～60分钟，反应温度为30～33℃，pH值为4.0～5.0。

5.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(1)中利用板框进行过滤，使用的介质为丙纶滤布，孔径为300～500目，板框进料压力为0～0.6MPa。

6.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的活性炭柱采用木质粉末活性炭，每吨发酵液用量为10～30kg，过柱流速控制在3吨～8吨/小时。

7.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(3)先用NaOH溶液调节水相pH值为9～11，然后加入1/4～1/2倍水相体积的乙酸乙酯，萃取2次，合并乙酸乙酯液，得到负载有机相。

8.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(4)加入0.5～1.5倍负载有机相体积的0.1N的酒石酸溶液反萃取2次，合并收集反萃取相。

9.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(5)中所述的精细过滤器的精滤板的孔径为0.45～1.0μm。

10.根据权利要求1所述的一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的方法，其特征在于，步骤(8)中控制真空干燥温度在60～80℃，真空度为-0.05～-0.1MPa，干燥12～36h，控制水分在1.0％以下。