[发明专利]可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法

权利要求书

1.可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法：包括胶质瘤干细胞分离、胶质瘤干细胞悬浮液培养和胶质瘤干细胞粘附培养。

2.根据权利要求1所述，可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法，其特征在于，第一步进行胶质瘤干细胞分离，具体步骤包括：(1)从病人脑内新鲜获得的胶质瘤组织放于含有15％PS的神经干细胞基础培养基，冰上运输；(2)取出组织，放于含有15％PS的神经干细胞基础培养基漂洗两次，并用显微外科手术剪刀剪除血管等杂物；(3)10cm培养皿中显微外科手术剪刀剪碎组织，加入5ml预温的accumax消化酶，37℃消化30分钟，每5分钟吹打一次；(4)5倍体积消化酶量的15％PS的神经干细胞基础培养基终止反应，1000转，5分钟，离心；(5)15％PS的神经干细胞基础培养基清洗2次；(6)计数，2×10⁶细胞/孔(6孔板)接种；37℃5％CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中继续培养。

3.根据权利要求1所述，可用于体外胶质瘤干细胞药物筛选应用模型的制备方法，其特征在于，第二步进行胶质瘤干细胞粘附培养，冻存，具体步骤包括：(1)上述细胞，成球后，accumax消化酶，37℃消化成单细胞，1000转，5分钟，离心；(2)计数，传代于matrigel包被的6孔板，密度为2×10⁵细胞/孔；传代第二天换液，余隔天换液；(3)密度大于90％，accumax消化酶消化成单细胞，传代或冻存(冻存液：GSC培养基：DMSO＝9:1)。