[发明专利]一种牛耳枫组织培养方法

权利要求书

1.一种牛耳枫组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)消毒处理：选用成熟、饱满、无病虫害的牛耳枫种子，去皮，清洗，消毒；

(2)初代培养：将步骤(1)处理后的外植体切开，剥取完整胚接种到初代培养基中培养，得到无菌小苗，其中，所述初代培养基为添加有0.1～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培养基；

(3)继代培养：无菌小苗切去根部后转接入继代培养基中培养30～35d，其中，所述继代培养基为添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA的WPM培养基；

(4)壮苗培养：将分化的小苗转接到壮苗培养基中培养25～35d，其中，所述壮苗培养基为添加有0.1～1.0mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/L的NAA、20～40g/L的蔗糖和5～8g/L卡拉胶的MS培养基；

(5)生根培养：将小苗切成单株，接种至生根培养基中诱导根的发育，得到生根苗，其中，所述生根培养基为添加有1.0～5.0mg/L的IBA、0.5～3.0mg/LNAA和20～40g/L蔗糖的1/2MS培养基；

(6)炼苗及移栽：生根苗置于室温下经7～10d的自然光炼苗，然后洗净根部培养基，移栽。

2.根据权利要求1所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述初代培养基为添加有0.5～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培养基。

3.根据权利要求2所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中所述初代培养基为添加有1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA的MS培养基。

4.根据权利要求1所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述继代培养基为添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA的WPM培养基。

5.根据权利要求4所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述继代培养基为添加有2.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA的WPM培养基。

6.根据权利要求1所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述壮苗培养基为添加有0.5mg/L的6-BA、0.05的NAA、30g/L的蔗糖和6g/L卡拉胶的MS培养基。

7.根据权利要求1所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(5)中所述生根培养基为添加有3.0mg/L的IBA、1.0mg/LNAA和25g/L蔗糖的1/2MS培养基。

8.根据权利要求1所述的牛耳枫组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中培养条件为：培养温度25～27℃，光强1300-1500Lux，每天光照9～10h；步骤(3)和步骤中培养条件为：培养温度25～27℃，光强1700-2000Lux，每天光照9～10h；步骤(4)中培养条件为：培养温度25～27℃，光强1700-2000Lux，每天光照9～10h；步骤(5)中培养条件为：培养温度27～29℃，光强1800～2200Lux，每天光照11～12h。

9.一种用于牛耳枫组织培养的培养基组，其特征在于，所述培养基组包括初代培养基、继代培养基、壮苗培养基和生根培养基，其中，

所述初代培养基为添加有0.1～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培养基；

所述继代培养基为添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.5mg/L的NAA的WPM培养基；

所述壮苗培养基为添加有0.1～1.0mg/L的6-BA、0.01～0.1mg/L的NAA、20～40g/L的蔗糖和5～8g/L卡拉胶的MS培养基；

所述生根培养基为添加有1.0～5.0mg/L的IBA、0.5～3.0mg/LNAA和20～40g/L蔗糖的1/2MS培养基。

10.根据权利要求9所述的培养基组，其特征在于，所述初代培养基为添加有0.5～1.0mg/L的6-BA和0.05～0.1mg/L的NAA的MS培养基；

所述继代培养基为添加有1.0～2.0mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA的WPM培养基；

所述壮苗培养基为添加有0.5mg/L的6-BA、0.05的NAA、30g/L的蔗糖和6g/L卡拉胶的MS培养基；

所述生根培养基为添加有3.0mg/L的IBA、1.0mg/LNAA和25g/L蔗糖的1/2MS培养基。