[发明专利]一种基于浊点系统的疏水性有机物降解菌筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有机污染物降解菌的筛选方法，具体地是一种基于浊点系统的疏水性有机物降解菌筛选方法。

背景技术

疏水性有机物包括脂肪烃、单环芳烃、多环芳烃、卤代烃、卤代芳烃和塑化剂等疏水性有机物的降解，往往难以降解，容易导致环境污染等危害。塑化剂是一种疏水性高分子有机物，长期食用可能引起生殖系统异常、甚至造成畸胎、癌症的危险。疏水性有机物的降解菌筛选具有重要意义。

疏水性有机物在传统的筛菌体系-水溶液中的溶解度很低，以至于水中可生物利用的底物含量有限，影响降解菌的生长繁殖。此外，在传统的水溶液筛选过程中，在水溶液中底物含量无差异的情况下，疏水性有机物穿越不同降解菌细胞膜速率的快慢，显著影响着不同降解菌的生长速率。也就是说吸收疏水性有机物更快的降解菌，生长速率更快，这会导致很多虽然生长速率较慢、但降解能力强效率更高的疏水性有机物降解菌筛选难度变大，或者被漏筛。

因此，现有的疏水性有机物降解菌的筛选存在以下问题，一方面，疏水性底物的生物利用度较低，降解菌难以利用；另一方面，生长速率较快的降解菌常常会抑制生长速率较慢的降解菌，导致后者筛选困难或者无法筛选到。

中国专利申请201510529421.8公开了浊点系统中萃取微生物降解疏水性有机物的方法，其中公开了一种将浊点系统用于疏水性有机物生物降解的新应用，即采用一种或一种以上非离子表面活性剂形成的浊点系统，该浊点系统适用于疏水性有机污染物的生物降解。

现有技术尚无将浊点系统有效用于疏水性有机物降解菌的筛选的报道。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供一种基于慢速分相浊点系统的疏水性有机物降解菌的筛选方法，筛选出比传统水溶液系统和快速分相浊点系统更多、降解效率更高效的降解菌。

本发明提供一种基于浊点系统的疏水性有机物降解菌筛选方法，包括以下步骤：

S1：取含有疏水性有机物降解菌的土壤、污泥或污水，用无菌生理盐水洗涤形成含有混合菌种的菌悬液；

S2：将S1得到的菌悬液接种到筛选体系中，接种量为5～20mL/L，摇床培养，得到含有机物降解菌的初筛菌悬液；

S3：将S2得到的初筛菌悬液分离得到单一纯菌株，分别接种到含有疏水性有机物的无机盐培养基中，筛选出具有较强降解能力的疏水性有机物降解菌；

所述筛选体系为非离子表面活性剂加入含有疏水性有机物的无机盐培养基中在20～30℃形成的浊点系统；所述非离子表面活性剂选自泊洛沙姆嵌段聚合物，所述非离子表面活性剂的体积百分含量为2～8％，所述疏水性有机物的含量为0.2～0.8g/L。

采用上述技术方案，通过加入泊洛沙姆嵌段聚合物形成慢速分相浊点系统，并将该慢速分相浊点系统作为疏水性有机物降解菌的筛选介质，不影响降解菌细胞生物活性，进而提高降解菌的筛选效率，获得更多、降解效率更高的浊点菌。一方面，通过该浊点系统的慢速分相作用，强化了增溶在凝聚层相中的疏水性有机物向水相的传质作用，提高了底物利用效率；另一方面，慢速分相浊点系统的形成，将有机物降解菌处理成渗透细胞，有机物进入慢速生长降解菌细胞和快速生长降解菌细胞的速率差异将减小，有利于不同降解菌的同步生长。本发明中形成的浊点系统在培养温度下分相时间长达1周以上，属于慢速分相浊点系统。本发明通过形成并利用慢速分相浊点系统筛选疏水性有机物降解菌，通过慢速分相和对降解菌细胞的渗透处理作用，进而提高降解菌的筛选效率。

优选地，所述非离子表面活性剂选自泊洛沙姆嵌段聚合物31R1、L61、L101、L121、L31、L92和N3中的一种或多种。泊洛沙姆的英文名为Pluronic，商品名为普兰尼克，本发明中的泊洛沙姆嵌段聚合物为常规市售产品，如购自SIGMA-ALDRICH中国有限公司。

更优选地，所述非离子表面活性剂由泊洛沙姆嵌段聚合物L61与N3以3～6:1的质量比组成。

进一步优选地，所述非离子表面活性剂由泊洛沙姆嵌段聚合物L61与N3以5:1的质量比组成。

优选地，所述疏水性有机物为塑化剂。

更优选地，所述疏水性有机物为邻苯二甲酸二辛酯。

优选地，所述摇床培养的条件为30℃、150r/min、恒温培养2天。

优选地，所述分离采用稀释涂布法。