[发明专利]一种人IL1RAP特异性CAR及其应用

说明书

本发明公开了一种人IL1RAP特异性CAR及其应用，所述CAR由IL1RAP特异性单链抗体scFV、共刺激分子和T细胞的活化CD3ζ链组成，其中scFV包含IL1RAP单克隆抗体McAb重链、轻链的可变区基因片段，共刺激分子为CD137。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述人IL1RAP特异性CAR引入CD137协同共刺激分子，提高了IL1RAP特异性CAR病毒转染T细胞后T细胞活化率，增强其对肿瘤细胞的杀伤能力；(2)本发明所述IL1RAP特异性CAR‑T细胞不仅可以发挥杀伤白血病细胞的作用，而且可在体内形成长寿的抗原特异性记忆T细胞，从而及时清除新生的白血病细胞。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种嵌合受体，尤其涉及一种人IL1RAP特异性CAR及其应用。

背景技术

慢性髓系白血病(Chronic Myelogenous Leukemia,CML)是一种发生在多能造血干细胞上的恶性骨髓增生性疾病，约占白血病的20％，以9号和22号染色体易位t(9；22)(q34；q11)形成的费城染色体(Ph)为特征。该易位形成一种新的融合基因BCR-ABL，此基因编码的融合蛋白p210或p190具有激活的酪氨酸激酶活性，导致髓系造血的异常克隆性增殖，是CML发生发展的根本原因，也是治疗CML的重要靶点。以伊马替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)，通过抑制BCR-ABL自身磷酸化和底物磷酸化而抑制细胞增殖和诱导凋亡，现已成为CML患者的一线治疗药物。尽管该药具有良好的疗效，但其对静息状态的白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)无效，使患者易产生耐药性及停药后复发，且存在部分患者原发耐药及可继发骨病等重大缺陷，导致其临床应用效果仍不能令人满意。因此，有效清除LSC可能在根本上改变CML的治疗现况，是当前治疗CML亟待解决的问题。

LSC自从被发现后就成为研究的热点，人们试图寻找到区分LSC和造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的表面标志。IL-1受体辅助蛋白(IL-1receptoraccessory protein,IL1RAP)是Toll-like受体超家族的一名成员，是IL-1RⅠ的共受体。IL1RAP基因位于人3号染色体q28，位于小鼠的16号染色体，编码570个氨基酸。RNA不同的剪切形式可形成膜型IL1RAP和可溶型IL1RAP两种形式，膜型IL1RAP是IL-1受体复合物的重要组成部分。最近研究表明，IL1RAP蛋白在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人的LSC表面过表达，且IL1RAP表达水平和AML的临床预后密切相关，沉默IL1RAP可降低AML细胞克隆集落形成，促进细胞凋亡。2010年Jaras等研究发现，IL1RAP在CML病人的LSC上表达显著升高，但在CD34⁺CD38^-的正常HSC上无表达或仅低表达。而在几乎所有正常的造血干细胞和成熟的各个细胞亚群上，IL1RAP的表达均为阴性或弱阳性。此外，研究表明胚胎期过度的IL-1/IL-1R1/IL1RAP信号限制HSC向髓系细胞正常分化，阻断IL1RAP则切断白血病细胞对外源和自分泌IL-1的利用，使白血病细胞增殖率、克隆形成率、克隆刺激活性明显下降。综上可见，在CML中IL1RAP是区分LSC和HSC特异的细胞表面标志，能诱导细胞免疫和体液免疫应答。针对IL1RAP设计药物或者疫苗，可避免正常组织损伤或自身免疫病。