[发明专利]获得病毒的方法在审
申请号: | 201610458702.3 | 申请日: | 2016-06-22 |
公开(公告)号: | CN107523555A | 公开(公告)日: | 2017-12-29 |
发明(设计)人: | 王学海;马梵辛;许勇;任科云;叶炜;陈艳;袁宏丽;何昆;田吕明;黄璐;刘哲;肖强 | 申请(专利权)人: | 武汉光谷人福生物医药有限公司;武汉珂美立德生物医药有限公司;湖北生物医药产业技术研究院有限公司;人福医药集团股份公司 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)11201 | 代理人: | 李志东 |
地址: | 430075 湖北省武汉市东湖高新技*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 获得 病毒 方法 | ||
1.一种获得病毒的方法,其特征在于,包括:
利用病毒种子感染宿主细胞,所述宿主细胞为HEK293细胞,且所述宿主细胞为悬浮培养在无血清培养基中的宿主细胞;以及
将感染后的宿主细胞继续进行悬浮培养,以便获得病毒,
其中,在进行所述感染时,所述病毒种子的病毒感染复数为10~50,所述宿主细胞在所述无血清培养基中的浓度为1.0~3.0×106cells/ml。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述宿主细胞在所述无血清培养基中的接种密度为3.0~5.0×105cells/ml。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将感染后的宿主细胞继续进行悬浮培养24~48h,以便获得病毒。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,将感染后的宿主细胞继续进行悬浮培养24~48h的过程中,葡萄糖在所述无血清培养基中的浓度为2~5g/L。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述病毒为腺病毒、慢病毒或逆转录病毒。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述无血清培养基为Gibco CD293 AGTTM/AEM,Hyclone CDM4/SFM4/PF-293*/SFM Transfx。
7.一种获得病毒的方法,其特征在于,包括:
1)HEK293细胞种子接种到生物反应器的无血清培养基Gibco CD293 AGTTM/AEM,Hyclone CDM4/SFM4/PF-293*/SFM Transfx中,接种密度为3.0~5.0×105cells/ml,并继续在生物反应器中进行悬浮培养;
2)当HEK293密度达到1.0~3.0×106cells/ml时,用腺病毒种子以病毒感染复数为10~50直接感染细胞并继续进行悬浮培养,葡萄糖的浓度控制在2~5g/L;
3)通过监测接毒后生物反应器内培养的细胞活率,当感染后24~48h,结束培养,分别收集细胞及培养上清,以便获得腺病毒。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述HEK293细胞种子预先复苏并扩增培养在无血清培养基中,HEK293细胞种子的复苏密度为3.0~5.0×105cells/ml,当生长到2.0~4.0×106cells/ml左右时,以细胞密度为3.0~5.0×105cells/ml进行扩增培养。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,进一步包括对所获得的腺病毒进行纯化。
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