[发明专利]抗EGFR突变体III单克隆抗体、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种抗EGFR突变体III单克隆抗体，该抗EGFR突变体III单克隆抗体的V_H链的互补区CDR具有选自下组的CDR氨基酸序列：SEQ ID NO 1所示的CDR1，SEQ ID NO 2所示的CDR2，SEQ ID NO 3所示的CDR3。本发明的抗EGFR突变体III单克隆抗体，通过实验验证其与野生型EGFR无交叉反应，免疫印迹和免疫荧光实验表明该抗EGFR突变体III单克隆抗体具有很高的特异性和很高敏感性，可以准确检测肿瘤细胞系以及肿瘤组织中EGFR突变体III的表达情况，可很好的用于肿瘤组织(细胞)EGFRvIII的检测，可广泛应用于肿瘤细胞的检测和治疗领域。

技术领域

本发明涉及抗体领域，特别是涉及抗EGFR突变体III(EGFRvIII)的单克隆抗体、制备方法及其应用。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR)是一个由原癌基因c-(erbB)-1编码的相对分子质量为170 000的跨膜糖蛋白。它是erbB受体酪氨酸激酶家族成员之一，具有受体酪氨酸激酶的活性。该家族包括：EGFR或人类EGF相关受体(HER)-1(erbB-1)、HER2(neu或erbB2)、HER3(erbB3)和HER4(erbB-4)，均定位于细胞膜上。人EGFR基因位于第7号染色体p13～q22区，全长200kb，由28个外显子组成，编码1186个氨基酸。EGFRvIII则是由EGFR基因内5’端外显子2～7发生缺失型变异而产生。

EGFRvIII缺失801个碱基对，对应于EGFR胞外段6～273位氨基酸，并在断端融合处产生了一个甘氨酸。EGFR包括胞外段、跨膜区和胞内段。胞外段由I、II、III、IV四个区组成。EGFRvIII缺失了胞外I区和II区的大部分，丧失了与配体的结合位点，因而不具备与配体结合的能力。

到目前为止，EGFRvIII在27％～50％的乳腺癌、将近6l％的恶性胶质瘤、39％的肺癌以及73％的卵巢癌中均被检测到，而在多种正常组织中未检测到，如乳腺、小肠、肾、睾丸、肺、脑、肝、皮肤、末梢神经、淋巴结、卵巢、骨髓、脾、子宫内膜和胎盘。在如此多的肿瘤中检测到EGFRvIII的高表达，表明EGFRvIII在致瘤过程中起重要作用，其表达与肿瘤细胞致瘤性的提高有着密切的关系。

目前，市场上尚无商品化的靶向EGFRvIII的小鼠单克隆抗体出售，兔多克隆抗体的特异性比较差，且由于多克隆抗体和单克隆抗体的制备方法以及免疫抗原的设计等因素，文献报道的和市场上已有的商品化的抗EGFRvIII的抗体均不同程度上与野生的EGFR存在交叉反应，抗EGFRvIII的抗体的特异性差，测得结果的准确性差。亟待进一步开发新的与野生的EGFR不存在交叉反应的抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗EGFR突变体III单克隆抗体，该单克隆抗体的应用以及该单克隆抗体的方法，该单克隆抗体的特异性好，与野生型EGFR无交叉反应。

为解决上述技术问题，本发明一种抗EGFR突变体III单克隆抗体，该抗EGFR突变体III单克隆抗体的V_H链的互补区CDR具有选自下组的CDR氨基酸序列：

SEQ ID NO 1所示的CDR1，SEQ ID NO 2所示的CDR2，SEQ ID NO3所示的CDR3；

该抗EGFR突变体III单克隆抗体的V_L链的氨基酸序列为SEQ ID NO 4所示。

所述抗EGFR突变体III单克隆抗体蛋白的分子量为150KD。

所述抗EGFR突变体III单克隆抗体为IgG2a亚型。

所述抗EGFR突变体III单克隆抗体与野生型EGFR无交叉反应。